[发明专利]一种用于细胞膜蛋白质标记的组合物及其应用

权利要求书

1.一种用于细胞膜蛋白标记的组合物，所述组合物包括：APEX2蛋白酶、过氧化氢和下述两种物质中的至少一种物质：生物素苯酚(BP)和生物素苯酚类似物。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述APEX2蛋白酶选自下述任一项：

A1)、氨基酸序列是SEQ ID No.1的蛋白质；

A2)、氨基酸序列是SEQ ID No.1的第37-285位的蛋白质；

A3)、在A1)或A2)所示的蛋白质的羧基端或/和氨基端融合标签蛋白得到的具有与A1)或A2)相同活性的融合蛋白。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于：所述APEX2蛋白酶按照包括如下步骤的方法制备：使所述APEX2蛋白酶的编码基因在生物细胞中进行表达得到所述APEX2蛋白酶。

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于：所述生物细胞为微生物细胞。

5.根据权利要求3或4所述的组合物，其特征在于：所述方法还包括分离纯化所述APEX2蛋白酶的步骤。

6.应用，所述应用为下述任一项：

P1)、权利要求1-5中任一项所述的组合物在细胞膜蛋白标记中的应用；

P2)、权利要求1-5中任一项所述的组合物在细胞膜蛋白功能分析中的应用；

P3)、权利要求1-5中任一项所述的组合物在蛋白组学研究中的应用。

7.一种细胞膜蛋白质标记的方法，所述方法包括如下步骤：

S1)、将待标记细胞与APEX2蛋白溶液、生物素苯酚溶液和无血清培养基共孵育获得孵育混合液-1，所述APEX2蛋白溶液的溶质为权利要求1-5中任一项所述组合物中所述的APEX2蛋白酶；

S2)、向S1)所述的孵育混合液-1中添加过氧化氢溶液共孵育，使生物素苯酚标记在待标记细胞的细胞膜蛋白质上，倒掉孵育液，获得孵育混合物-2；

S3)、向S2)所述孵育混合物-2添加淬灭剂，终止过氧化氢的反应。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述APEX2蛋白溶液的浓度为200μg/mL，所述生物素苯酚溶液的浓度为500μmol/L，所述过氧化氢溶液的浓度为1mmol/L。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于：所述淬灭剂的组分为：0.5M Trolox，1M抗坏血酸钠，1M叠氮化钠，其余为PBS。

10.用于细胞膜蛋白标记的试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒含有权利要求1-5中任一项所述的组合物。