[发明专利]促进干细胞外泌体分泌的培养液、外泌体制备及应用

说明书

本发明公开了一种促进干细胞外泌体分泌的培养液、外泌体制备及应用，该培养液中包括基础培养基、重组人胰岛素1~10mg/L、人转铁蛋白5~10mg/L、重组人纤连蛋白20~40mg/L、人血清白蛋白1~5g/L、维生素C 50~200mg/L、维生素B6 5~20mg/L、维生素B1 60~150mg/L、维生素A 20~50mg/L、EGF 2~10μg/L、bFGF10~20μg/L、β‑巯基乙醇5~15mg/L、谷胱甘肽1~5mg/L及1~5umol/L的长梗秦艽酮。该培养液中长梗秦艽酮组分具有抗肿瘤及促进间充质干细胞抗炎外泌体的分泌作用；同时，低氧环境下培养，可以促进间充质干细胞的分泌活动，有效提高外泌体的浓度。

技术领域

本发明涉及干细胞培养技术领域，尤其涉及一种促进间充质干细胞外泌体分泌的培养液、外泌体制备方法及应用。

背景技术

已知干细胞具有免疫调控的作用，如，对宿主体内的T细胞、B细胞、NK细胞、巨噬细胞、树突状细胞等多种免疫细胞均有免疫调节功能。干细胞对免疫调控主要起抑制作用，如，平衡Th1/Th2细胞群、诱导Treg细胞增殖、抑制T细胞增殖、抑制B细胞活化、抑制树突状细胞成熟、促进机体的免疫耐受等。对于干细胞的免疫调控作用，主要是由其分泌的外泌体发挥作用，间充质干细胞是分泌外泌体能力最强的细胞，间充质干细胞分泌的外泌体是一类直径为30nm~150nm，密度为1.13~1.19g/ml的膜性囊泡样小体。

为了对抗肝损伤，组织通过诱导免疫细胞活化来启动先天和适应性免疫反应。肝损伤和免疫反应之间的不平衡导致炎症和进一步的损伤；因此，免疫抑制是肝细胞再生和损伤修复所必需的。间充质干细胞外泌体能减少促炎细胞因子IL-1β、IL-12、IFN-α、IL-2和IL-4的分泌，并促进抗炎细胞因子TGF-β和IL-10的分泌，导致免疫抑制。因此间充质干细胞外泌体可用于各种肝损伤，包括急性和慢性肝炎、代谢性肝病、肝硬化的自身免疫和并发症以及肝细胞癌的治疗途径。

目前已有将脐带间充质干细胞和骨髓间充质干细胞分泌的外泌体用于肝损伤修复、急性肝衰竭和病毒性肝炎药物的报道，但存在稳定性和作用效果不够理想的问题。因此，提供一种稳定性好、肝脏修复效果好的一种间充质干细胞外泌体制剂具有重要意义。

发明内容

基于上述问题，本发明所要解决的问题在于提供一种可以促进间充质干细胞分泌外泌体的培养液以及外泌体获取方法与应用。

本发明所要解决的技术方案一如下：

一种促进间充质干细胞分泌外泌体的培养液，该培养液中包括基础培养基、重组人胰岛素1~10mg/L、人转铁蛋白5~10mg/L、重组人纤连蛋白20~40mg/L、人血清白蛋白1~5g/L、维生素C 50~200mg/L、维生素B6 5~20mg/L、维生素B1 60~150mg/L、维生素A 20~50mg/L、EGF 2~10μg/L、bFGF10~20μg/L、β-巯基乙醇5~15mg/L、谷胱甘肽1~5mg/L及1~5umol/L的长梗秦艽酮。

一实施例，所述培养液中，该培养液中包括基础培养基、重组人胰岛素2~8mg/L、人转铁蛋白6~8mg/L、重组人纤连蛋白25~35mg/L、人血清白蛋白2~4g/L、维生素C 80~160mg/L、维生素B6 10~15mg/L、维生素B1 80~120mg/L、维生素A 30~40mg/L、EGF 5~8μg/L、bFGF14~18μg/L、β-巯基乙醇8~12mg/L、谷胱甘肽2~4mg/L及2~4umol/L的长梗秦艽酮。

一实施例，所述培养液中，该培养液中包括基础培养基、重组人胰岛素5mg/L、人转铁蛋白7mg/L、重组人纤连蛋白31mg/L、人血清白蛋白3.2g/L、维生素C 100mg/L、维生素B612mg/L、维生素B1 110mg/L、维生素A 36mg/L、EGF 6μg/L、bFGF 15μg/L、β-巯基乙醇11mg/L、谷胱甘肽3mg/L及3umol/L的长梗秦艽酮。