[发明专利]一种高产纳米硒酵母的培育方法

权利要求书

1.一种高产纳米硒酵母的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）制备活化种子液；

（2）采用等离子和紫外诱变，筛选高产纳米硒菌株；

（3）对诱变菌株进行传代培养，确定其遗传稳定性；

（4）将传代培养后的菌株种子液接种到发酵培养基中发酵培养，在发酵培养过程中添加亚硒酸钠溶液发酵培养；

（5）收集发酵液，离心、洗涤，烘干粉碎，得干硒酵母粉；

（6）将步骤（5）得到的干硒酵母粉配制成硒酵母水溶液，将硒酵母水溶液与破壁酶溶液混合后孵育，加入萃取剂，收集中间水相，离心、洗涤，收集沉淀，即为纳米硒酵母。

2.根据权利要求1所述的一种高产纳米硒酵母的培育方法，其特征在于：步骤（1）种子液为酿酒酵母种子液，制备活化种子液的具体过程为：-80℃取出酿酒酵母，接种于YPD固体培养基中进行平板划线，然后置于30℃恒温培养箱培养2天，挑取长势较好单菌落于50/250mL YPD液体培养基中培养，培养条件为30-40℃，250-400 rpm培养24-35h。

3.根据权利要求2所述的一种高产纳米硒酵母的培育方法，其特征在于：所述YPD固体培养基为：Tryptone 10-30 g/L，Yeast 5-15 g/L，Glucose 25-40 g/L，Agar Powder 15-30g/L；所述YPD液体培养基为：Tryptone 10-30 g/L，Yeast 5-15 g/L，Glucose 25-40 g/L。

4.根据权利要求1所述的一种高产纳米硒酵母的培育方法，其特征在于：步骤（2）诱变时间10-70s，紫外时间10s，平台高度20mm，气体流量12slm。

5.根据权利要求4所述的一种高产纳米硒酵母的培育方法，其特征在于：步骤（2）诱变时间为50s。

6.根据权利要求1所述的一种高产纳米硒酵母的培育方法，其特征在于：步骤（3）传代培养的培养基为无机盐发酵培养基，培养初始时，培养基中加入终浓度为300μg/mL亚硒酸钠溶液发酵培养，发酵培养的条件为：30-40℃，250-400rpm培养48-58 h；培养6-9代。

7.根据权利要求1或6任意一项所述的一种高产纳米硒酵母的培育方法，其特征在于：步骤（4）所述发酵培养基为无机盐发酵培养基，无机盐发酵培养基为：Glucose 60-80 g/L、Urea 4-6 g/L、KH₂PO₄ 1-3 g/L、KCl 1-3 g/L、MgSO₄ 0.5-2 g/L、CaCl₂ 0.2-0.4 g/L，添加微量元素及维生素；培养基母液灭菌处理。

8.根据权利要求7所述的一种高产纳米硒酵母的培育方法，其特征在于：所述微量元素mg/L：硫酸锌6.4 mg/L、硫酸亚铁8mg/L、硫酸铜0.52 mg/L、硫酸锰 0.68 mg/L、钼酸钠0.48mg/L、碘化钾0.2 mg/L、氯化镍0.32mg/L；所述维生素mg/L：生物素0.044mg/L、B56.4mg/L、B1 2.1mg/L、B8 16.8mg/L、B6 0.3mg/L、B3 0.52mg/L、B2 0.01mg/L。

9.根据权利要求1所述的一种高产纳米硒酵母的培育方法，其特征在于：步骤（4）中添加亚硒酸钠溶液的时间为发酵0-27h时，浓度为100-800μg/mL，发酵培养的条件为：30℃，250 rpm培养48 h。

10.根据权利要求1所述的一种高产纳米硒酵母的培育方法，其特征在于：步骤（6）所述硒酵母水溶液的pH值为4-5，所述萃取剂为正己烷。