[发明专利]一种基于寡糖链检测肺癌的检测试剂、制备方法及应用

说明书

本发明提供了一种基于寡糖链检测肺癌的检测试剂及其制备方法和应用，检测试剂由以下试剂混合而成，试剂A：浓度为10mM、pH为8.3的碳酸氢铵溶液中加入质量浓度1～5％的SDS配制而成；试剂B：由0.05～10单位/10μl糖胺酰酶、质量浓度10％的NP‑40和浓度为10mM、pH为8.3的碳酸氢铵溶液混合配制而成，混合溶液pH值为5～9；试剂C：由8‑氨基芘‑1,3,6‑三磺酸溶于DMSO中配制成浓度为0.02mM～1M有机物还原剂；试剂D：终止液。本发明通过该试剂测定血清中的天然寡糖N‑糖组图谱，再将峰值量化并进行统计学分析，从而提供一种肺癌的血清天然寡糖N‑糖组图谱模型的建立方法，通过测定生理病理状态下蛋白质的天然糖基化修饰的改变来检测肺癌。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种肺癌的检测方法，具体涉及一种基于血清寡糖链G-Test特异指纹图谱的肺癌检测方法。

背景技术

恶性肿瘤是威胁我国居民生命健康的重大慢性疾病，其中肺癌的发病率和死亡率均居于首位。发现肺癌以临床晚期居多，主要原因是肺癌发病隐匿，其临床表现与生长部位、浸润程度、转移以及伴癌综合征有关，一旦出现临床症状，多数已经是中晚期，其五年生存率较早期发现的肺癌明显下降。因此，早筛早诊是延长肺癌患者生存期的前提。目前低剂量螺旋CT是筛查肺癌的主要方式，但是其存在较多局限性，如对高危人群的定义标准不一、假阳性率过高、过度诊断及成本效益问题等。此外血清学标志物作为一种非侵入性检查方式逐渐受到关注，临床上常用的血清标志物癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)等诊断早期肺癌的敏感性仅有35％左右，敏感性较低。上述诊断方法都有自身的局限性，目前急需探索出用于辅助诊断肺癌并具有较高灵敏度和特异度的新型无创性的方法。

蛋白质糖基化(Glycosylation)是一种最常见的蛋白翻译后修饰，是在糖基转移酶作用下将糖类转移至蛋白质肽链上的天冬酰胺(ASN)的胺基形成N-连接聚糖或苏氨酸/丝氨酸的羟基氧原子形成O连接聚糖，参与调控蛋白质的功能。大多数的糖蛋白都是分泌蛋白，广泛存在于细胞膜、细胞间质、血浆以及粘液中。蛋白质上N-糖链通过加工修饰来调控蛋白质的结构，稳定性和活性，所以糖蛋白中糖链对于维持机体生物学功能起重要作用，从而赋予糖蛋白具有多种生物功能。因此了解糖链的改变有助于阐明炎症、肿瘤细胞对周围组织侵袭及转移等异常生物行为学的分子机理。

目前已经在多种肿瘤中发现了蛋白质N-糖链的异常改变，而N-糖链的末端唾液酸修饰改变是其中之一。唾液酸是一类带负电荷的9碳糖化合物，广泛存在于生物体内，常位于聚糖链末端；其在唾液酸酶的作用下通过α-2,3或α-2,6糖苷键与糖链上的半乳糖或N-乙酰半乳糖胺连接形成聚唾液酸链。研究发现聚糖链末端的唾液酸在调控细胞的相互识别、分子相互作用、病毒感染、免疫响应以及信号传导起到重要的功能，且细胞表面糖蛋白质唾液酸修饰具有组织和细胞特异性。众多研究表明唾液酸修饰异常导致了多种疾病的发生发展，如感染性疾病的发生、以及肿瘤的浸润和转移有着密切关系。因此，检测唾液酸相关寡糖链的改变对肺癌辅助诊断具有潜在的临床价值。

发明内容

针对目前临床上使用的肺癌检测中存在的问题，如血清学标志物敏感性较低，低剂量螺旋CT对高危人群的定义标准不一、假阳性率过高、过度诊断及成本效益问题等，本发明提供一种肺癌检测试剂，通过该试剂测定血清中的天然寡糖N-糖组图谱，再将峰值量化并进行统计学分析，从而提供一种肺癌的血清天然寡糖N-糖组图谱模型的建立方法，通过测定生理病理状态下蛋白质的天然糖基化修饰的改变来检测肺癌。

本发明采用的技术方案如下：

一种基于寡糖链检测肺癌的检测试剂，由以下试剂组成：

试剂A：浓度为10mM、pH为8.3的碳酸氢铵溶液中加入质量浓度1～5％的SDS配制而成；

试剂B：由0.05～10单位/10μl糖胺酰酶、质量浓度10％的NP-40和浓度为10mM、pH为8.3的碳酸氢铵溶液混合配制而成，混合溶液pH值为5～9；