[发明专利]一种提高干细胞活性的培育方法

权利要求书

1.一种提高干细胞活性的培育方法，包括培养基、间充质干细胞与填充剂，其特征在于，所述填充剂包括胶原蛋白与透明质酸，所述培养基包括培养基干粉、谷氨酰胺、4-羟乙基哌嗪乙磺酸、碳酸氢钠与水，其称重比例如下：培养基干粉10份，谷氨酰胺1份，4-羟乙基哌嗪乙磺酸0.8份、碳酸氢钠1.4份，余量为水。

2.根据权利要求1所述的一种提高干细胞活性的培育方法，其特征在于，所述间充质干细胞的密度为3*10⁶-8*10⁶个/ML。

3.根据权利要求1所述的一种提高干细胞活性的培育方法，其特征在于，所述间充质干细胞的培养方法，包括如下步骤：

S1：取出培养皿，并对培养皿进行灭菌，同时向培养基的内部添加适量的生理盐水，与此同时，取出需要培养的间充质干细胞，首先将间充质干细胞放入恒温水浴箱的内部进行水浴结冻，从而使得间充质干细胞回复活力，再将结冻完毕的间充质干细胞移动至培养皿的内部；

S2：通过贴壁培养的方式对间充质干细胞进行培养，且保持间充质干细胞的密度为：1*10⁴-10*10⁴个/CM²；

S3：此时将培养完毕的间充质干细胞放置在水浴恒温箱的内部，保持水浴恒温箱的温度为37摄氏度。

4.根据权利要求3所述的一种提高干细胞活性的培育方法，其特征在于，上述步骤S1中所述的灭菌为通过紫外线进行照射，且照射时间为30分钟。

5.根据权利要求1所述的一种提高干细胞活性的培育方法，其特征在于，所述透明质酸通过D-葡萄糖醛酸与N-乙酰葡糖胺混合制备，所述填充剂通过透明质酸与胶原蛋白混合制备。

6.根据权利要求1所述的一种提高干细胞活性的培育方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1：按照上述步骤称重填充剂、间充质干细胞与培养基，并将D-葡萄糖醛酸与N-乙酰葡糖胺混合搅拌，同时对其加热，使其融合在以及，将D-葡萄糖醛酸与N-乙酰葡糖胺融合制备成透明质酸，此时向透明质酸的内部添加适量的胶原蛋白，并对混合物进行搅拌，进而制备上述所需的填充剂；

S2：首先取出一组六孔板，并向其内部添加基质液，同时轻微的摇晃六孔板，使得基质液均匀的覆盖多孔板，此时将多孔板放入培养箱中进行恒温孵育，孵育温度保持37摄氏度，孵育时间为1-3小时，培养箱为二氧化碳培养箱；

S3：孵育完毕后，取出六孔板，并将其放置在工作台静置半小时，同时取出干细胞，将其放置在工作台进行静置平衡，平衡时间为一小时，同时静置条件为避光平衡；

S4：此时向六孔板的内部均与滴入干细胞消化液，使得干细胞消化液均匀的覆盖六孔板的底部，并将六孔板放置在培养箱中进行培养，培养时间为五分钟，培养箱为二氧化碳培养箱；

S5：取出培养后的六孔板，并将将静置平衡后的干细胞均匀的移动至六孔板的内部，同时将六孔板放入恒温水浴箱的内部，水浴箱的温度保持在37摄氏度，通过消化液进行消化处理，消化时间为四分钟；

S6：取下六孔板，将六孔板内部多余的消化液通过吹打的方式去除；

S7：向六孔板的内部添加制备完成的填充剂、间充质干细胞以及培养基，通过混合液对干细胞进行培养，并将六孔板放入二氧化碳恒温培养箱的内部进行恒温培养，温度为37摄氏度，时间为24小时；

S8：取出六孔板，观察六孔板内部干细胞的贴壁情况以及干细胞的活性，并对其进行换液，换液完毕后，重复上述步骤S6。

7.根据权利要求5所述的一种提高干细胞活性的培育方法，其特征在于，上述步骤S3中所述的工作台，通过紫外线照明灯照明杀菌，照明时间为一小时。

8.根据权利要求5所述的一种提高干细胞活性的培育方法，其特征在于，上述步骤S4中所述的干细胞消化液用于促进干细胞生长与消化。

9.根据权利要求5所述的一种提高干细胞活性的培育方法，其特征在于，上述步骤S6中所述的吹打方式采用移液枪扇形吹打的方式去除培养基。

10.根据权利要求5所述的一种提高干细胞活性的培育方法，其特征在于，上述步骤S8中所述的换液时间间隔为24小时。