[发明专利]人工模拟cfDNA标准品及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种人工模拟cfDNA标准品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将背景细胞系的gDNA和突变细胞系的gDNA混合，制得混合gDNA；

采用缺刻酶切的方式将所述混合gDNA打断，制得所述cfDNA标准品；

其中，所述背景细胞系为未发生突变的细胞系，所述突变细胞系为在预设位点发生突变的细胞系。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述缺刻酶切的方式是指：采用核酶使所述混合gDNA随机产生缺口，然后采用缺刻切割酶把所述缺口切断。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法满足以下(1)～(2)中的一个或多个条件：

(1)所述核酶包括创伤弧菌核酸酶、脱氧核糖核酸酶I、Nt.CviPII切刻内切酶以及Nb.BsmI切刻内切酶中的一种或多种；

(2)所述缺刻切割酶包括T7核酸内切酶。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述背景细胞系的gDNA与突变细胞系的gDNA混合的摩尔比为(90～99.99)：(0.01～10)。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，采用缺刻酶切的方式将所述混合gDNA打断后，所得片段的主峰大小为150bp～500bp。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，采用缺刻酶切的方式将所述混合gDNA打断后，还包括对所述片段进行筛选的步骤，筛选后所得的目标片段的主峰大小为200bp～400bp。

7.根据权利要求1～6任一项所述的制备方法，其特征在于，所述突变细胞系的gDNA的突变频率为0.01％～10％。

8.一种人工模拟cfDNA标准品，其特征在于，由权利要求1～7任一项所述的制备方法制得。

9.如权利要求8所述的人工模拟cfDNA标准品在血液cfDNA检测中的应用。

10.一种cfDNA文库的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

将权利要求8所述的人工模拟cfDNA标准品按照以下操作进行处理：末端修复、加多聚腺嘌呤尾、接头连接、PCR扩增以及文库纯化。

11.一种cfDNA文库，其特征在于，通过权利要求10所述的构建方法获得。

12.一种高通量测序方法，其特征在于，包括以下步骤：

对权利要求11所述的cfDNA文库进行靶向捕获，然后进行数据分析。