[发明专利]一种胰腺炎症转化为胰腺癌模型及其构建方法与应用

权利要求书

1.一种胰腺炎症转化为胰腺癌模型，其特征在于，敲除小鼠3号染色体的S100A9基因。

2.一种胰腺炎症转化为胰腺癌模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一：采用“胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠法”构建胰腺炎小鼠模型；

步骤二：利用流式细胞仪检测胰腺腺泡细胞ROS的释放水平；

步骤三：H₂O₂诱导小鼠原代胰腺腺泡细胞出现ADM表型；

步骤四：构建S100A9稳定过表达的266-6细胞株；

步骤五：构建s100a9-/-C57BL/6小鼠；

步骤六：观察S100A9在胰腺ADM及胰腺炎恶性转化中的作用。

3.如权利要求2所述的一种胰腺炎症转化为胰腺癌模型的构建方法，其特征在于，所述步骤一的具体方法如下：

大鼠禁食12h，自由饮水，腹腔注射40mg/kg戊巴比妥钠进行麻醉，麻醉成功后取仰卧位，固定于鼠板，上腹部脱毛备皮，在无菌操作下行正中切口入腹，充分暴露术野，用小动脉夹夹闭肝门处胰胆管，于胰胆管汇合处逆行注射5.0％牛磺胆酸钠，以0.1mg/100g体重注射。

4.如权利要求2所述的一种胰腺炎症转化为胰腺癌模型的构建方法，其特征在于，所述步骤二的具体方法如下：

①按照“原代胰腺腺泡细胞提取分离”的方法提取分离胰腺炎诱导ADM病变小鼠的原代胰腺腺泡细胞，体外继续培养24h；

②按照1:1,000比例用无血清培养液稀释DCFH-DA探针，使其终浓度为10μM；

③收集原代胰腺腺泡细胞，重悬于稀释好的DCFH-DA溶液中，37℃孵育20min，每隔3～5min颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触；

④细胞用无血清细胞培养液充分洗涤，最后采用流式细胞仪进行检测。

5.如权利要求2所述的一种胰腺炎症转化为胰腺癌模型的构建方法，其特征在于，所述步骤三的具体方法如下：提取分离正常小鼠的原代胰腺腺泡细胞，并将其接种于96孔板中，细胞贴壁之后，每孔分别加入200μL H₂O₂终浓度为0、25、50、100和200μM的Waymouth's完全培养基，在37℃和5％CO₂的恒温培养箱中进行24h培养，然后每孔更换200μL完全培养基，并加入20μL 5mg/mL的MTT溶液，继续在培养箱中培养，4h后终止培养，小心吸去孔内培养液，每孔加入100μLDMSO，低速振荡10min充分溶解紫色结晶物，最后采用多功能酶标仪在490nm波长下测量各孔的OD值，同时设置调零孔和对照孔，计算各组间的相对细胞活力，以此评价H₂O₂对小鼠原代胰腺腺泡细胞的细胞毒作用，然后在倒置显微镜的明场下进行观察以确定H₂O₂对原代胰腺腺泡细胞的影响。