[发明专利]一种冠心舒通胶囊抗心肌缺血的生物标志物的辨识方法

说明书

一种评价药物制剂质量或药效学的生物标志物及其检测方法。属于生物医学领域，本发明采用TMT蛋白质组学技术鉴定及筛选与心脑血管类疾病相关的差异表达蛋白，最终确定43个差异蛋白，这些差异蛋白可以作为部分心脑血管类疾病潜在的生物标志物。通过差异蛋白不仅可以评价中药复方制剂与机体作用时的生物效应，间接反映药物的有效性和安全性，为现行中药质量评价体系提供有效的补充，也可为临床精准医学的实施提供有力的工具。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一组评价药物制剂质量或药效学的生物标志物及其检测方法

背景技术

中药复方制剂是在中医药理论指导下，以中医方剂为基础，中药材为原料，通过提取、分离、纯化制成直接供临床使用的各种复方制剂。中药复方制剂作为中医药产业发展中的重要代表，已成为中药现代化发展不可或缺的一部分。针对中药复方制剂种类繁多、成分复杂、作用机理不明确等问题，中药研究者们已经进行大量基础研究并获得了不错的成就。从传统的单一指标检测发展到多指标，从外观形态鉴别发展到整体质量评价，包括指纹图谱的发展、“一测多评”方法的应用、中药质量标志物的提出，都为中药复方制剂的质量评价带来了新思路。

冠心舒通胶囊是心血管系统疾病常用的中药复方制剂，批准文号：国药准字Z20020055，由陕西步长制药有限公司生产，其主要成分由广枣、丹参、丁香、冰片、天竺黄组成，具有活血化瘀，通经活络，行气止痛的功效。临床主要用于胸痹、心血瘀阻证，症见胸痛、胸闷、心慌、气短；冠心病、心绞痛见上述症候者。不良反应为个别患者用药后出现恶心、胃部不适、胃中嘈杂不安等胃肠道反应。

目前，2020版中国药典一部对于冠心舒通胶囊的质量控制如下：冰片、丁香照气相色谱法(通则0521)测定，丹参酮ⅡA、丹酚酸B照高效液相色谱法(通则0512)测定。申请号为200510124510.0的发明专利公开了：一种用于治疗冠心病、心绞痛的中药胶囊剂及其制法和质量控制方法，其中对冠心舒通胶囊的质量控制分为鉴别与含量测定，鉴别方面，对丹参、丁香、冰片采用薄层色谱法鉴别；含量测定方面，因冰片具有挥发性，易升华，故采用气相色谱法对冰片进行含量测定，采用高效液相色谱法对丹参酮ⅡA、丹酚酸B进行含量测定。申请号为201410003476.0的发明专利公开了一种治疗冠心病的中药制剂的指纹图谱测定方法，该中药指纹图谱建立了包括没食子酸、丹参素钠、原儿茶酸等有效成分在内的30个特征峰，能有效控制冠心舒通胶囊的产品质量。可见，现有技术已有报道采用分析化学的方法对冠心舒通胶囊进行质量控制，但如何通过生物学手段对冠心舒通胶囊进行质量控制，现有技术罕有报道。此外，现有技术未提供生物学手段来评价中药复方制剂与机体作用时的生物效应，也未提供心血管疾病患者在服用冠心舒通后，如何通过生物学手段观察其治疗情况。

蛋白质组学作为一门新兴学科，可以从整体水平研究蛋白组成及生物学功能，不仅可以得知发挥作用的蛋白质的身份，而且还可以通过测定蛋白质的浓度了解其在细胞水平的生物学功能。在心血管疾病的研究领域，蛋白质组学主要用于研究鉴定影响心血管疾病的病理生理机制和发展过程，涉及心脏发育先天性缺损，动脉粥样硬化，高血压，心肌炎，心肌病，心肌梗死，心律失常，心力衰竭，动脉瘤等。在过去的十年中，蛋白质组学技术得以迅猛发展，包括样品准备，质谱分析，数据库搜索以及生物信息学技术等，为心血管疾病研究提供一整套客观的蛋白质分析，对心血管领域疾病机制研究级临床药物研发做出了重大的贡献。

本研究采用目前最新的，功能最为强大的TMT蛋白质组学技术鉴定及筛选与心肌缺血相关的差异表达蛋白。TMT(TandemMassTags)是由赛默公司开发的一种体外标记技术，广泛用于差异表达蛋白质分析研究中。该技术采用6重或10重同位素标签，与肽段的氨基发生共价结合反应，可实现同时对6个/10个不同样品中蛋白质的定性和定量分析。