[发明专利]β-葡聚糖与M2巨噬细胞靶向肽偶联物、制备方法及重塑肿瘤微环境和免疫抗肿瘤的应用

说明书

本发明公开一种β‑葡聚糖与M2巨噬细胞靶向肽偶联物、制备方法及其在抗肿瘤、重塑肿瘤微环境和增强免疫中的应用。本发明是通过首先对β‑葡聚糖还原端进行氨基修饰，然后再将氨基与末端带有马来酰亚胺的NHS活泼酯反应形成酰胺键，最终利用马来酰亚胺与M2型巨噬细胞靶向肽末端巯基的高效Click反应共价偶联得到。本发明反应效率高、产物结构特征明确、反应位点专一及无副产物，得到的糖肽偶联物既能发挥M2靶向肽的靶向作用，又能发挥β‑葡聚糖的免疫调节作用，可以将肿瘤微环境中免疫抑制状态的M2型巨噬细胞复极化成发挥促炎免疫调节作用的M1巨噬细胞。本发明可以用于制备抗肿瘤药物、免疫调节剂、保健品以及特殊医学用途配方食品。

技术领域

本发明属于化学合成医药技术领域，一种β-葡聚糖与M2巨噬细胞靶向肽偶联物、制备方法及其在抗肿瘤、重塑肿瘤微环境和增强免疫中的应用。

背景技术

β-葡聚糖是一类由葡萄糖残基通过β-糖苷键以不同连接方式组成的多糖，β- 葡聚糖类化合物在自然界中广泛存在，天然来源的β-葡聚糖主要存在于各种真菌、细菌与海藻中，且不同结构的β-葡聚糖有不同的生物活性。β-葡聚糖被广泛报道可以通过激活巨噬细胞、树突细胞等发挥免疫调节、抗炎、抗病毒及抗肿瘤等作用。

巨噬细胞源自免疫系统中单核细胞，几乎存在于所有组织中。巨噬细胞作为一种具有可塑性和多能性的细胞群体，在体内外不同的微环境影响下，表现出明显的功能差异。根据活化状态和发挥功能的不同，巨噬细胞主要可分为经典活化的M1型巨噬细胞，和替代性活化的M2型巨噬细胞。M1巨噬细胞表型由IFN-γ或LPS诱导，呈促炎和杀微生物功能表型。相反，M2巨噬细胞被IL-4和IL-13 激活，在缓解炎症和组织重塑中发挥作用。

目前大多数癌症疗法都集中在杀死恶性细胞上，但这些细胞通常在遗传上不稳定，并且可以对化疗产生抗药性。肿瘤相关巨噬细胞(TAM)通过促进血管生成和肿瘤细胞生长以及抑制适应性免疫反应来促进疾病进展，肿瘤微环境中的 TAM已被证明为免疫抑制的M2样表型。因此，TAM是辅助抗癌治疗的潜在靶点。2013年，研究报道了一种独特的肽序列(M2pep,YEQDPWGVKWWY)，该肽优先与小鼠M2巨噬细胞/TAM结合，对其他表型巨噬细胞的亲和力低。尾静脉注射具有促凋亡肽的M2pep融合肽可延缓小鼠死亡率并选择性地减少M2样TAM群体。

现有技术存在的技术问题为：目前没有现有技术研发出β-葡聚糖与M2巨噬细胞靶向肽偶联物，并在重塑肿瘤微环境中、制备免疫增强剂、抗肿瘤药物、保健品以及特殊医学用途配方食品应用的先例。

解决以上问题及缺陷的意义为：(1)首次制备出一种β-葡聚糖与M2巨噬细胞靶向肽偶联物，制备方法具有反应效率高、产物结构特征明确、反应位点专一及无副产物等特点，可大规模产业化。(2)利用具有靶向M2巨噬细胞功能的肽序列，通过与具有免疫调节作用的β-葡聚糖共价偶联得到糖肽偶联物(BG-MP)。基于该策略得到的糖肽偶联物既能发挥M2pep的靶向作用，又能发挥β-葡聚糖的免疫调节作用，可以将肿瘤微环境中免疫抑制状态的M2型巨噬细胞复极化成发挥促炎免疫调节作用的M1巨噬细胞，且效果较单独使用β-葡聚糖、单独使用 M2型巨噬细胞靶向肽以及β-葡聚糖与M2型巨噬细胞靶向肽的混合物显著，起到“1+12”的效果。该发明重塑肿瘤微环境中、制备免疫增强剂、抗肿瘤药物、保健品以及特殊医学用途配方食品有重要应用。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种β-葡聚糖与M2巨噬细胞靶向肽偶联物、制备方法及其在重塑肿瘤微环境中的应用。

一种β-葡聚糖与M2巨噬细胞靶向肽偶联物，所述β-葡聚糖与M2巨噬细胞靶向肽偶联物的结构如下：

其中所述糖肽偶联物结构式中n＝1～30，m＝1-50。

本发明的β-葡聚糖与M2巨噬细胞靶向肽偶联物的制备方法，