[发明专利]β-葡聚糖与M2巨噬细胞靶向肽偶联物、制备方法及重塑肿瘤微环境和免疫抗肿瘤的应用

权利要求书

1.一种β-葡聚糖与M2巨噬细胞靶向肽偶联物，其特征在于，所述β-葡聚糖与M2巨噬细胞靶向肽偶联物的结构如下：

其中所述糖肽偶联物结构式中n＝1～50，m＝1-10。

2.一种如权利要求1所述的β-葡聚糖与M2巨噬细胞靶向肽偶联物的制备方法，其特征在于：

(1)首先对β-葡聚糖还原端进行氨基修饰，将末端带有胺基的二酰肼、二酰胺等连接臂通过还原胺化反应，连接到β-葡聚糖还原末端，得到末端胺基的β-葡聚糖衍生物(BG-R-NH₂)；

(2)然后再将末端带有马来酰亚胺的NHS活泼酯通过酰胺反应，与末端胺基的β-葡聚糖衍生物反应形成酰胺键，得到末端马来酰亚胺的β-葡聚糖衍生物(BG-Mal)；

(3)最终利用M2型巨噬细胞靶向肽末端巯基通过高效Click反应与末端马来酰亚胺的β-葡聚糖衍生物共价偶联，得到β-葡聚糖还原末端与M2型巨噬细胞靶向肽共价偶联的糖肽偶联物(BG-MP)。

3.根据权利要求2所述β-葡聚糖与M2巨噬细胞靶向肽偶联物的制备方法，其特征在于，所述β-葡聚糖与M2巨噬细胞靶向肽偶联物的具体制备步骤如下：

(1)将β-葡聚糖(BG)与连接臂己二酸二酰肼(ADH)溶解于二甲亚砜/乙酸混合反应溶剂中，氮气保护下，于60℃水浴中反应1小时，随后加入氰基硼氢化钠(NaBH₃CN)，继续反应48小时，反应结束后，加入等体积氯化钠盐溶液，混匀，加入4倍体积无水乙醇醇沉，离心10分钟，沉淀再次加氯化钠溶液只刚好溶解沉淀，继续醇沉，反复3次后收集沉淀，透析48小时后经减压浓缩后经冷冻干燥即可得β-葡聚糖还原末端带有氨基的β-葡聚糖衍生物(BG-ADH)。

(2)将上述得到的β-葡聚糖衍生物(BG-ADH)与末端带有马来酰亚胺的NHS活泼酯(sulfo-SMCC)溶解在PBS缓冲溶液中，氮气保护下，于40℃水浴中反应3小时，反应结束后，加入等体积氯化钠盐溶液，反复醇沉3次后收集沉淀，透析后经浓缩、冻干即可得β-葡聚糖还原末端马来酰亚胺基团的β-葡聚糖衍生物(BG-SMCC)。

(3)将上述得到的β-葡聚糖衍生物(BG-SMCC)与M2型巨噬细胞靶向肽(M2pep)溶解于DMSO/DMF混合溶剂中，氮气保护下，于40℃水浴中反应4小时，反应结束后，加入等体积氯化钠盐溶液，反复醇沉3次后收集沉淀，透析后经浓缩、冻干即可得β-葡聚糖还原末端与M2型巨噬细胞靶向肽共价偶联的糖肽偶联物(BG-MP)。

4.根据权利要求3所述的β-葡聚糖与M2巨噬细胞靶向肽偶联物的制备方法，其特征在于：β-葡聚糖分子量为0.1kDa～100kDa，单糖组成以葡萄糖为主比例在95％以上，其连接方式为主链由葡萄糖通过β-1,3糖苷键连接而成，同时在主链上具有β-1,6分支，分支度为1％～60％。

5.根据权利要求3所述的β-葡聚糖与M2巨噬细胞靶向肽偶联物的制备方法，其特征在于：所选肽为M2型巨噬细胞靶向肽(M2pep)和含有M2型巨噬细胞靶向肽活性片段(YWWKVGWPDQWY)的其他肽类药物类似物。

6.根据权利要求3所述的β-葡聚糖与M2巨噬细胞靶向肽偶联物的制备方法，其特征在于：所述β-葡聚糖与M2型巨噬细胞靶向肽中间的连接链特征为链两端为氨基、酰肼基，中间有2个碳到12个碳的长度，包括二酰肼类、二胺类化合物。

7.根据权利要求3所述的β-葡聚糖与M2巨噬细胞靶向肽偶联物的制备方法，其特征在于：所述β-葡聚糖与M2型巨噬细胞靶向肽中间的连接链特征为链一端为NHS活泼酯，另一端为带马来酰亚胺，中间有2个碳到12个碳的长度，包括N-羟基琥珀酰亚胺-R-马来酰亚胺(Mal-R-NHS)类。

8.如权利要求1-7任意一项所述β-葡聚糖与M2巨噬细胞靶向肽偶联物在抗肿瘤的药物、保健品以及特殊医学用途配方食品中的用途；在重塑肿瘤微环境中的用途。