[发明专利]一种高活性抗菌肽及其制备方法

说明书

本发明公开了一种高活性抗菌肽及其制备方法，涉及生物技术领域。本发明利用鱼类副产物为原料，经绞碎后，利用微生物菌剂对其进行发酵处理，再配合酶解，使鱼类副产物降解更充分，小肽化程度更高，提高抗菌活性；接着利用绿茶多糖进行接枝处理，增强抗菌肽的稳定性和抑菌活性，减弱鱼腥味和酶解苦味；然后利用2‑氯苯酚、3‑(氯甲基)苯乙酸改性β‑环糊精，以此为抗氧化壁材，包覆抗菌肽，表面存在部分微孔，有效吸附细菌，提高抗菌肽的抗菌性，还能长期稳定持续地发挥抗菌作用。本发明制备的高活性抗菌肽具有长效抗菌、抗氧化的效果。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体为一种高活性抗菌肽及其制备方法。

背景技术

抗菌肽是生物体内经诱导产生的一种具有生物活性的小分子多肽，分子量在2000～7000左右，由20～60个氨基酸残基组成。这类活性多肽多数具有强碱性、热稳定性以及广谱抗菌等特点。与抗生素相比，抗菌肽安全性高，对人和动物正常细胞无害，属无毒副作用、无残留、无致细菌耐药性的一类生物防腐剂，在医药工业、食品工业以及饲料工业中有广阔的应用前景。

鱼类养殖业在我国发展迅速，每年加工能够产生约60％～70％的副产物，大多数被丢弃处理，这不仅仅是自愿的极大浪费，而且造成环境污染。因此研究鱼类副产品抗菌肽的制备能够大大拓宽抗菌肽资源。此外，常规的酶解法获得抗菌肽的抗菌活性有限，也不具备长效抗菌效果，而且药理活性较为单一。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高活性抗菌肽及其制备方法，以解决现有技术中存在的问题。

为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：一种高活性抗菌肽，所述高活性抗菌肽由以下方法制得，将鱼类副产物绞碎后，加入去离子水，接种微生物菌种，摇床培养一段时间后，灭菌、离心，得发酵液；将发酵液经酶解处理后，灭酶、冷却，离心得多肽；用盐酸调节多肽pH，加入绿茶多糖，水浴加热得美拉德反应产物；将改性β-环糊精、去离子水水浴加热后，加入美拉德反应产物，乳化、冷喷雾。

进一步的，所述鱼类副产物为鱼鳞、鱼头、鱼骨、鱼内脏的一种或多种混合。

进一步的，所述改性β-环糊精由β-环糊精、2-氯苯酚、3-(氯甲基)苯乙酸制得。

进一步的，一种高活性抗菌肽的制备方法，包括以下制备步骤：

(1)将鱼类副产物置于绞肉机绞碎后，加入鱼类副产物质量1.5～2.0倍的去离子水，121℃灭菌20min后，接种微生物菌种，发酵液含菌量为6×10⁶～2×10⁸CFU/mL，30℃、180rpm摇床培养20～24h后，128℃灭菌28min，10000rpm离心20～30min，取上清液，抽滤得发酵液；

(2)将发酵液置于鱼类副产物质量2～3倍的去离子水，酶解处理后，100℃灭酶15～20min后，冷却至4℃，10000rpm离心20～30min，取上清液，抽滤得多肽；

(3)向多肽加入盐酸至溶液pH为5～6，加入多肽质量0.1～0.2倍的绿茶多糖，搅拌溶解后，水浴加热80～100min后，用冰水冷却至室温，得美拉德反应产物；

(4)将β-环糊精、异黄酮化合物、碳酸钾按质量比1:0.4:1～1:0.6:2混合，搅拌均匀后，氮气氛围下，加入β-环糊精质量28～36倍的四氢呋喃、β-环糊精质量2～5倍的N,N-二甲基甲酰胺，90℃、480rpm搅拌46～50h后，冷却至室温，过滤，用质量分数为2.5％的盐酸洗涤6～10次，加入β-环糊精质量48～55倍的去离子水、β-环糊精质量40～50倍的四氢呋喃，100rpm搅拌30～46min后，抽滤，加入β-环糊精质量64～76倍的二氯甲烷，100rpm搅拌10～20min，抽滤，得改性β-环糊精；