[发明专利]一种高活性抗菌肽及其制备方法

权利要求书

1.一种高活性抗菌肽，其特征在于，所述高活性抗菌肽由以下方法制得，将鱼类副产物绞碎后，加入去离子水，接种微生物菌种，摇床培养一段时间后，灭菌、离心，得发酵液；将发酵液经酶解处理后，灭酶、冷却，离心得多肽；用盐酸调节多肽pH，加入绿茶多糖，水浴加热得美拉德反应产物；将改性β-环糊精、去离子水水浴加热后，加入美拉德反应产物，乳化、冷喷雾。

2.根据权利要求1所述的一种高活性抗菌肽，其特征在于，所述鱼类副产物为鱼鳞、鱼头、鱼骨、鱼内脏的一种或多种混合。

3.根据权利要求1所述的一种高活性抗菌肽，其特征在于，所述改性β-环糊精由β-环糊精、2-氯苯酚、3-(氯甲基)苯乙酸制得。

4.一种高活性抗菌肽的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：

(1)将鱼类副产物置于绞肉机绞碎后，加入鱼类副产物质量1.5～2.0倍的去离子水，121℃灭菌20min后，接种微生物菌种，发酵液含菌量为6×10⁶～2×10⁸CFU/mL，30℃、180rpm摇床培养20～24h后，128℃灭菌28min，10000rpm离心20～30min，取上清液，抽滤得发酵液；

(2)将发酵液置于鱼类副产物质量2～3倍的去离子水，酶解处理后，100℃灭酶15～20min后，冷却至4℃，10000rpm离心20～30min，取上清液，抽滤得多肽；

(3)向多肽加入盐酸至溶液pH为5～6，加入多肽质量0.1～0.2倍的绿茶多糖，搅拌溶解后，水浴加热80～100min后，用冰水冷却至室温，得美拉德反应产物；

(4)将β-环糊精、异黄酮化合物、碳酸钾按质量比1:0.4:1～1:0.6:2混合，搅拌均匀后，氮气氛围下，加入β-环糊精质量28～36倍的四氢呋喃、β-环糊精质量2～5倍的N,N-二甲基甲酰胺，90℃、480rpm搅拌46～50h后，冷却至室温，过滤，用质量分数为2.5％的盐酸洗涤6～10次，加入β-环糊精质量48～55倍的去离子水、β-环糊精质量40～50倍的四氢呋喃，100rpm搅拌30～46min后，抽滤，加入β-环糊精质量64～76倍的二氯甲烷，100rpm搅拌10～20min，抽滤，得改性β-环糊精；

(5)将改性β-环糊精、去离子水按质量比1:15～1:28混合，54℃水浴加热8～14min后，加入改性β-环糊精质量0.06～0.1倍的美拉德反应产物，乳化后，冷喷雾得高活性抗菌肽。

5.根据权利要求4所述的一种高活性抗菌肽的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述微生物菌种中细菌、霉菌和酵母菌含量比例为2:1:1。

6.根据权利要求4所述的一种高活性抗菌肽的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述酶解处理具体步骤为：加入氢氧化钠至溶液pH为8，然后加入鱼类副产物质量0.003～0.007倍的胰蛋白酶，50℃下酶解2～3h后，加入盐酸至溶液pH为3.0，再加入鱼类副产物质量0.005～0.008倍的酸性蛋白酶，40℃下酶解2～3h。

7.根据权利要求4所述的一种高活性抗菌肽的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述水浴加热温度为90～110℃。

8.根据权利要求4所述的一种高活性抗菌肽的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述异黄酮化合物的制备方法为：将2-氯苯酚、3-(氯甲基)苯乙酸、三氟化硼乙醚按质量比1:1.0:8～1:1.8:12混合，83℃搅拌3～5h后，冷却至室温，加入2-氯苯酚质量6～11倍的N,N-二甲基甲酰胺，搅拌1～3h后，加入2-氯苯酚质量12～20倍的N,N-二甲基甲酰胺、2-氯苯酚质量2～3倍的五氯化磷，搅拌2～5h后，加入2-氯苯酚质量2～4倍的100℃的质量分数为10％的盐酸，冷却至室温，过滤。

9.根据权利要求8所述的一种高活性抗菌肽的制备方法，其特征在于，所述搅拌速度为60～90rpm。

10.根据权利要求4所述的一种高活性抗菌肽的制备方法，其特征在于，步骤(5)所述乳化速度为2000rpm，乳化时间为3～6min。