[发明专利]CEA截短体、其制备方法和应用

说明书

本申请公开了一种CEA截短体及其制备方法和应用。本申请中开发了基于基因工程技术的CEA制备方法，该方法通过对CEA蛋白进行截短改造，获得CEA截短体，经人源同义密码子偏好性优化的编码CEA截短体的多核苷酸导入载体，构建了CEA真核表达体系，提高了可溶性目的蛋白的表达量和活性，易于分离纯化。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，特别涉及CEA截短体、其制备方法和应用。

背景技术

癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen，CEA)，是一种免疫球蛋白超家族的细胞表面粘附分子。CEA包括702个氨基酸，主要通过磷脂酰肌醇(GPI)锚固在细胞膜上。血清CEA的测定对患有恶性病的患者，尤其是对于结肠直肠癌患者的预后和处理具有重大意义。续测定可以监控经过治疗的患者癌症的渐进、回归或复发等现象。临床上已将CEA动态检测作为其阳性肿瘤早期诊断及预后评价的重要监控指标之一。近年来研究发现，CEA也可以为人体内特异性T细胞识别，诱发抗肿瘤免疫反应，因此又被用于CEA阳性肿瘤的免疫生物治疗。

现有技术中已公开了一些CEA的制备方法，例如天然提取法和原核系统表达法。天然提取需要用次氯酸从结肠癌肝转移灶中沉淀肿瘤细胞抽提物，然后经离子交换层析和亲和层析获得，但该法得到的CEA可能是不同特性的数个分子的混合物，分离难度高。利用原核表达系统表达缺乏人CEA翻译后后加工与修饰，存在产物生物学活性较低、灵敏度低的缺点。

为克服原核系统表达的缺陷，部分研究人员开发了基于真核表达系统的CEA制备方法，但其表达量极低，难以工业化。

因此，本领域尚需寻找可大量表达生物学活性较高的人源CEA蛋白的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种CEA截短体。

本发明的另一目的在于提供一种重组CEA截短体制备方法。

本发明的另一目的在于提供一种编码CEA截短体的多核苷酸序列。

本发明的另一目的在于提供与编码CEA截短体的多核苷酸序列适配的载体。

本发明的另一目的在于提供含有编码A-CEA截短体的多核苷酸序列的载体。

本发明的另一目的在于提供含有编码CEA截短体的多核苷酸序列的试剂盒。

为解决上述技术问题，本发明第一方面，提供了一种CEA截短体，且所述CEA截短体选自以下任一种：

(i)具有如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列的多肽；

(ii)具有与如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示序列的同源性大于95％的氨基酸序列的多肽。

本发明第二方面，提供了一种编码CEA截短体的多核苷酸，所述多核苷酸经密码子优化，且所述多核苷酸选自以下任一种：

(i)具有如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.4所示序列的多核苷酸；

(ii)具有与如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.4所示序列的同源性大于95％的多核苷酸；和

(iii)具有与(i)或(ii)中所述的多核苷酸序列互补的多核苷酸。

本发明第三方面，提供了一种表达载体，所述表达载体包括本发明第二方面提供的多核苷酸。

在一些优选的方案中，所述表达载体为哺乳动物表达载体，更优选为pcDNA3.4。

在一些优选的方案中，所述表达载体包括编码A蛋白的多核苷酸序列，更优选地，所述表达载体中，所述的多核苷酸的5’端连接有编码A蛋白的多核苷酸序列。