[发明专利]猴痘病毒检测靶标的应用及猴痘病毒检测组合物、试剂盒

权利要求书

1.将F3L基因上保守性DNA片段中第104-131位作为猴痘病毒特异性检测靶标在制备猴痘病毒检测试剂上的应用。

2.将F3L基因上保守性DNA片段中第104-131位作为猴痘病毒特异性检测靶标在制备猴痘病毒检测试剂盒上的应用。

3.将F3L基因上保守性DNA片段中第104-131位作为猴痘病毒特异性检测靶标在制备用于减少患者发生猴痘病毒感染的危险性的试剂中的应用。

4.将F3L基因保守性DNA片段中第104-131位作为猴痘病毒特异性检测靶标在制备试剂中的应用，其特征在于：所述试剂用于评价患者在进行减少猴痘病毒感染治疗中获益的可能性。

5.一种确定患者感染猴痘病毒的组合物，其特征在于：至少包括用于检测猴痘病毒F3L基因保守性DNA片段第104-131位的第一引物、第二引物、以及探针。

6.根据权利要求5所述的确定患者感染猴痘病毒的组合物，其特征在于：

所述第一引物为SEQ ID NO:1：5’-CAGCCAATTTAGCTGCATTATT-3’；

所述第二引物为SEQ ID NO:2：5’-AATCAGTGGGGCCTAGTAACTC-3’；

所述探针为SEQ ID NO:3：5’-CTTCCGTCAATGTCTACACAGGCA-3’；

所述探针的5’端标记有荧光报告基团一，所述探针的3’端标记有荧光淬灭基团一；其中所述荧光报告基团一选自FAM、VIC、HEX、CY5、CY3、JOE和ROX中的任一种；所述荧光淬灭基团一选自BHQ和TAMRA中的任一种。

7.根据权利要求5所述的确定患者感染猴痘病毒的组合物，其特征在于：所述组合物还包括内标引物对和内标探针。

8.根据权利要求7所述的确定患者感染猴痘病毒的组合物，其特征在于，所述内标引物对包括：

第一内标引物SEQ ID NO:4：5’-CCATCTTCCAGGAGCGAGA-3’；

第二内标引物SEQ ID NO:5：5’-ATGATGACCCTTTTGGCTCC-3’；

内标探针SEQ ID NO:6：5’-TCGTGGAGTCCACTGGCGTCTT-3’；

所述内标探针的5’端标记有荧光报告基团二，所述内标探针的3’端标记有荧光淬灭基团二，所述荧光报告基团二选自FAM、VIC、HEX、CY5、CY3、JOE和ROX中的任一种，所述荧光淬灭基团二选自BHQ和TAMRA中的任一种。

9.一种用于检测猴痘病毒的试剂盒，其特征在于：包括权利要求5-8任一项所述的组合物。

10.根据权利要求9所述的用于检测猴痘病毒的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括PCR反应MIX，阳性质控和阴性质控；

其中，PCR反应MIX包括PCR缓冲液、dNTP溶液、TaqDNA聚合酶、UDG酶；

其中，PCR缓冲液包括Tris-HCl、MgCl2、KCl和Triton X-100，在PCR缓冲液中Tris-HCl的浓度为10~50mM、MgCl₂的浓度为3~6mM，KCl的浓度为10~50mM，Triton X-100的浓度为1%~10%；

dNTP溶液包括dATP、dTTP、dCTP、dGTP和dUTP，在dNTP溶液中dATP的浓度为0.1~0.3mM、dTTP的浓度为0.1~0.3mM、dCTP的浓度为0.1~0.3mM、dGTP的浓度为0.1~0.3mM，dUTP的浓度为0.1~0.3mM；

单次检测反应液中包含1.5U~3U的TaqDNA聚合酶和0.5U~2U的UDG酶；

阳性质控包括含有人工合成猴痘F3L基因序列的pUC57质粒，浓度为1×10³~1×10⁶copies/mL，以及含有人工合成GAPDH基因序列的pUC57质粒，浓度为1×10³~1×10⁵copies/mL；

阴性质控为含有人工合成GAPDH基因序列的pUC57质粒，浓度为1×10³~1×10⁵copies/mL。