[发明专利]EB病毒磁微粒化学发光检测试剂盒

说明书

本发明涉及病毒检测领域，具体涉及EB病毒磁微粒化学发光检测试剂盒。本发明通过抗原筛选，获得了以天然抗原gp125蛋白为抗原的EB病毒磁微粒化学发光检测试剂盒，并对其中试剂进行了优化，降低检测背景的同时增加了抗体的稳定性。经实验表明，本发明所述的EB病毒磁微粒化学发光检测试剂盒稳定性好、特异性强、灵敏度高，同时本发明的EB病毒磁微粒化学发光检测试剂盒结构简单，用于EB病毒检测的时间成本低、稳定性好，可以与全自动化学发光仪结合实现全自动高通量检测，具有较强的临床应用意义。

技术领域

本发明涉及病毒检测领域，具体涉及EB病毒磁微粒化学发光检测试剂盒。

背景技术

EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)属于疱疹病毒科γ亚科，主要侵犯B淋巴细胞，EB病毒感染引起细胞的异常增生和转化。研究发现，EB病毒具有易感性，与多种人类恶性肿瘤密切相关，如鼻咽癌、传染性单核细胞增多症(Infectious monon-ucleosis，IM)和伯基特淋巴瘤等。EB病毒增殖后期，合成大量的VCA结构蛋白，与病毒DNA组成核衣壳，并进一步装配成完整的病毒体。参考EB病毒衣壳抗原IgM抗体的滴度，可以对IM患者的临床感染周期进行相应的评估。

现有的EB病毒的检测方法都存在一定的缺陷，如病毒分离法耗时且培养条件要求高，不适于常规临床应用，免疫酶法稳定性差、操作繁琐且技术要求高，基层应用不便，酶联免疫法反应时间长且自动化程度低，胶体金层析法成本昂贵且准确度低。而磁微粒化学发光法稳定性好、操作简单、响应快速、特异性强、灵敏度高，可以实现样本的全自动化高通量检测，但目前就磁微粒化学发光中存在抗体稳定性差、易受背景干扰等问题。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供EB病毒磁微粒化学发光检测试剂盒。

本发明提供了试剂组合，其包括酶结合物、样品稀释液和磁微粒悬液；

所述酶结合物为抗人IgM；

所述样品稀释液包括抗人IgG；

所述磁微粒悬液中的磁微粒包被有EB病毒衣壳抗原；所述抗原分子量为为125±10kD。

本发明中，所述EB病毒衣壳抗原的制备方法为：以EB病毒株侵染细胞，裂解侵染细胞并分离纯化得到EB病毒衣壳抗原。

进一步的，本发明所述的试剂组合中，

酶结合物为辣根过氧化物酶标记的抗人IgM；

样品稀释液的溶剂为PBS缓冲液，所述样品稀释液包括体积分数为1％～3％的抗人IgG；

磁微粒悬液的缓冲液为含有体积分数为20％～50％小牛血清的Tris缓冲液，所述磁微粒悬液中EB病毒衣壳抗原的工作浓度为10μg/mL～250μg/mL；所述磁微粒的直径为0.2μm～4μm，磁微粒的种类为羧基磁微粒。

更进一步的，本发明所述的试剂组合中，样品稀释液还包括体积分数为1％～5％的抗人IgA、体积分数为20％～50％的小牛血清、浓度为1mg/mL～5mg/mL的蛋白稳定剂和体积分数为0.5％～3％的防腐剂；所述蛋白稳定剂为多羟基糖类，所述多羟基糖类包括但不限于蔗糖；所述防腐剂包括P300。

在本发明的一些具体实施例中，

所述的样品稀释液为：体积分数为2％的抗人IgG、体积分数为2％的抗人IgA、体积分数为30％的小牛血清、浓度为2mg/mL的蔗糖和体积分数为1％的P300。

所述的磁微粒悬液的缓冲液为含有体积分数为30％的小牛血清的Tris缓冲液，所述磁微粒悬液中EB病毒衣壳抗原的工作浓度为50μg/mL。