[发明专利]一种可溶性HCV重组蛋白的制备方法及其制备的抗体检测试剂

说明书

本发明提供了一种可溶性HCV重组蛋白的制备方法及其制备的抗体检测试剂，所述HCV重组蛋白包括截短的NS3蛋白和截短的Core蛋白，可提高机体对于HCV抗原的免疫应答程度，有利于抗KCV疫苗的开发，以及HCV诊断抗体的筛选；优化了HCV重组蛋白制备工艺，包括使用大肠杆菌偏好密码子设计所述重组蛋白核苷酸序列，提高生产能力；优化制备过程中的工艺步骤和操作参数，并提供了具有良好生产性能的发酵培养基，从而获得高纯度的重组蛋白；基于所述HCV重组蛋白，免疫小鼠获得了目标抗原具有高亲和力的单克隆抗体，能够有效识别HCV；利用所述抗体，构建检测试剂盒，能够有效检测HCV感染情况，从而提供了一种兼具高特异性、高灵敏性和良好稳定性的检测手段。

技术领域：

本发明属于疾病诊断领域，具体提供了一种可溶性HCV重组蛋白的制备方法及其制备的抗体检测试剂。

背景技术：

慢性丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus，HCV)感染是导致肝纤维化、肝硬化和肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)的主要原因之一。尽管可以使用直接作用抗病毒药物(direct-acting antivirals，DAA)进行有效治疗，DAA可以令人满意地治疗95％以上的HCV感染者，从而降低肝癌和肝硬化的死亡风险，但全世界仍有约7100万人长期感染该病毒，因此面临发展为终末期肝病的风险(World Health Organization.Global HepatitisReport.World Health Organization；Geneva,Switzerland:2017)。DAA药物过于昂贵，因此大规模治疗存在社会经济障碍，特别是在低收入和中等收入国家，因此仅适用于发展中国家和发达国家的一小部分感染患者。此外，DAA治疗不能预防或阻止癌变的发生，DAA治疗后，HCC复发率甚至可能增加(Sanduzzi-Zamparelli M.,Boix L.,Leal C.,ReigM.Hepatocellular carcinoma recurrence in HCV patients treated with directantiviral agents.Viruses.2019；11:406)。并且，再感染在高危人群中仍然存在，使得单纯依靠药物治疗丙型肝炎难以得到令人满意的效果。因此，HCV的诊断不足仍然是一个严峻的挑战，开发有效的新型HCV诊断试剂显得尤为重要。

HCV感染的常规诊断系统涉及血清学生物标志物和分子检测。血清学生物标志物可检测抗HCV抗体或HCV抗原，而分子检测可检测HCV RNA。目前，使用血清学检测来检测抗HCV抗体是HCV检测算法中的第一步，因为它们比分子检测更易于处理且更经济实惠。

检测抗HCV抗体的金标准血清学测试是第三代酶免疫测定法(EIA)，即ORTHO HCV3.0版ELISA测试系统(Ortho Diagnostic Systems，美国)和Murex抗HCV 4.0(MurexDiagnostics，英国)多重检测检测使用不同核心、NS3、NS4和NS5重组抗原的抗HCV抗体。EIA的变体包括化学发光免疫测定(CLIA)，Foresight HCV EIA测试(ACONLabs,US)就是这种情况，酶促CLIA，如鲁米诺-H₂O₂-辣根过氧化物酶(HRP)和化学发光微粒免疫测定法(CMIA)。其他相关HCV抗体检测技术，包括荧光免疫测定法、抗HCV抗体检测蛋白芯片法等，也都在临床上得到了应用。