[发明专利]一种可溶性HCV重组蛋白的制备方法及其制备的抗体检测试剂

权利要求书

1.一种特异性识别HCV的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区包括氨基酸序列如SEQ ID No.3-5所示的CDR-H1-3；所述抗体的轻链可变区包括氨基酸序列如SEQ IDNo.6-8所示的CDR-L1-3。

2.如权利要求1所述的特异性识别HCV的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.9所示。

3.如权利要求1所述的特异性识别HCV的单克隆抗体，其特征在于，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.10所示。

4.一种检测丙型肝炎病毒的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3任一项中所述的单克隆抗体。

5.权利要求1-3任一项中所述的单克隆抗体在制备检测丙型肝炎病毒试剂盒中的应用。

6.一种可溶性HCV重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述HCV重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述制备方法包括：构建携带所述HCV重组蛋白基因的表达载体；将所述表达载体导至大肠杆菌表达系统中；高密度发酵培养大肠杆菌；收集大肠杆菌菌体，分离纯化获得可溶性HCV重组蛋白。

7.如权利要求6所述的可溶性HCV重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述HCV重组蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

8.如权利要求7所述的可溶性HCV重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法还包括：通过PCR扩增所述重组蛋白基因，并在其核苷酸序列两端引入Xho I和EcoR I酶切位点，酶切后连接至pET28a载体，电转化入DH5α感受态细胞中；筛选阳性克隆，酶切和测序鉴定正确克隆；将所述重组蛋白基因连接至原核表达载体pGEX 6P-1中，将所述原核表达载体导入大肠杆菌BL21，扩大培养后接种于生物反应器中，加入发酵培养基，37℃培养，通气量0.8-1.5L/L·min，搅拌速率350-450r/min；加入IPTG诱导16小时，离心收集菌体；所述菌体经超声破碎，用Protein A法纯化蛋白，获得所述可溶性HCV重组蛋白。

9.如权利要求8所述的可溶性HCV重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述发酵培养基包括胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，磷酸一氢钾2.34g/L，磷酸二氢钾3.58g/L，氯化钠10g/L，七水硫酸镁0.64g/L，六水氯化铁0.56g/L，甘油10g/L，葡萄糖5g/L。