[发明专利]天冬氨酸酶突变体及其在R-3-氨基丁酸合成中的应用

权利要求书

1.一种天冬氨酸酶突变体，其特征在于，其为下列任一突变体：

突变体4，所述突变体4是在氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的野生型天冬氨酸酶基础上，将第237位的Thr突变为Cys得到，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

 突变体1，所述突变体1是在氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的野生型天冬氨酸酶基础上，将其第31位的Ile突变成Val、第237位的Thr突变为Cys得到，其氨基酸序列如SEQ IDNO.5所示；

 突变体2，所述突变体2是在氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的野生型天冬氨酸酶基础上，将第88位的Lys突变成Asn、第237位的Thr突变为Cys得到，其氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示；

 突变体3，所述突变体3是在氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的野生型天冬氨酸酶基础上，将第123位的Gly突变成Ser、第237位的Thr突变为Cys得到，其氨基酸序列SEQ ID NO.9所示。

2.编码权利要求1所述天冬氨酸酶突变体的核苷酸序列，其特征在于，编码突变体4的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码突变体1的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，编码突变体2的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，编码突变体3的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。

3.表达权利要求1所述天冬氨酸酶突变体的重组菌，其特征在于，所述重组菌的原始表达载体为pET-29a（+）。

4.根据权利要求3所述的表达权利要求1所述天冬氨酸酶突变体的重组菌，其特征在于，所述重组菌的宿主菌为Escherichia coli BL21（DE3）。

5.一种权利要求1所述天冬氨酸酶突变体的高密度发酵方法，其特征在于，它包括如下步骤：

1）取权利要求3或4所述重组菌，在培养基中培养至OD₆₀₀值为2~3，得种子液；

2）取种子液，加入发酵培养基中培养，培养至OD₆₀₀值为70～90，添加诱导剂进行蛋白的诱导表达，得发酵液。

6.权利要求5所述天冬氨酸酶突变体的高密度发酵方法， 其特征在于，步骤2)中，所述发酵培养基成分及配比为：Na₂HPO₄·12H₂O：5-30 g/L，KH₂PO₄：3-15 g/L，NH₄Cl：2-15 g/L，蛋白胨：5-40 g/L，酵母浸粉：5-30 g/L，甘油：5-40 g/L，以水为溶剂。

7.权利要求1所述天冬氨酸酶突变体在合成R-3-氨基丁酸中的应用。

8.权利要求3或4所述的重组菌在合成R-3-氨基丁酸中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，合成体系中，底物为巴豆酸，底物浓度100-300 g/L，镁离子浓度10-100mmol/L，反应pH8.0-10.0，温度36-48℃，时间6-8h。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，合成体系中，底物浓度300 g/L。