[发明专利]高通量血清全谱维生素检测仪器及检测方法

说明书

本发明提供高通量血清全谱维生素检测仪器及检测方法，包括泵、自动进样器、预柱、色谱柱、四通阀、质谱仪及废液瓶。本方案将水溶性维生素和脂溶性维生素前处理方法统一，其检测仪器实现水溶性维生素和脂溶性维生素的一次进样检测，检测方法灵敏度高、特异性强、定性定量结果准确，解决了目前水溶性维生素和脂溶性维生素分别进行前处理和分别进行检测的问题，并降低仪器成本，缩短前处理时间以及上机分析时间，显著增加分析通量，更加适合临床大样本量的分析检测。

技术领域

本发明涉及全谱维生素检测技术领域，具体为高通量血清全谱维生素检测仪器及检测方法。

背景技术

脂溶性维生素和水溶性维生素与多种疾病具有相关性，因此人体血清中全谱维生素的检测具有临床意义，其检测结果能够为疾病的预防，诊疗提供依据。

目前全谱维生素的检测，水溶性维生素和脂溶性维生素采用单独的检测方法，需要分别进行前处理以及上机分析，导致全谱维生素检测过程前处理操作繁琐，耗时长，分析时间长、分析通量低、仪器损耗大、成本高，因此，需要发展前处理简便、高通量、检测成本低的全谱维生素检测仪器及方法，以适合临床大样本量的全谱维生素检测。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了高通量血清全谱维生素检测仪器及检测方法，解决了上述背景技术中提出的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：高通量血清全谱维生素检测仪器及检测方法，包括泵、自动进样器、预柱、色谱柱、四通阀、质谱仪及废液瓶。

优选的，使用检测仪器，包括如下步骤：

S1、泵1运行低比例有机相，样品经自动进样器进样，进入预柱，水溶性维生素流出预柱，经四通阀进入色谱柱1，脂溶维生素停留在预柱上，泵1运行的同时泵2运行，流动相为脂溶维生素流动相初始比例，冲洗平衡色谱柱2；

S2、水溶维生素进入色谱柱1，四通阀1切换，泵2运行水溶维生素流动相梯度，水溶性维生素进行分离检测，四通阀1切换后，泵1变为高比例有机相，将预柱上的脂溶性维生素洗脱至色谱柱2；

S3、水溶性维生素检测结束后，四通阀1和四通阀2切换，泵2运行脂溶性维生素流动相梯度，脂溶维生素进行分离检测，泵1运行低比例有机相，冲洗预柱及色谱柱1。

优选的，进行样品前处理，包括如下步骤：

步骤一、移取200μL血清样本于1.5mL离心管，加入600μL含内标的乙腈溶液(含抗氧化剂)，涡旋震荡5min，后置于台式高速冷冻离心机内，在4℃条件下以13000rpm离心10min；

步骤二、离心结束后，吸取全部上层澄清溶液于另一1.5mL离心管，冻干；

步骤三、冻干结束后，100μL甲醇复溶，振荡5min，在4℃条件下以13000rpm离心10min，移取上清液，上机分析。

优选的，使用经过所述前处理方法制得的样本进行检测。

优选的，所述检测方法为全谱维生素检测方法，实现水溶性维生素和脂溶性维生素的同时检测。

优选的，所述水溶性维生素使用ACQUITY UPLC HSS T3 2.1×100mm×1.8μm的色谱柱进行检测，所述水溶性维生素检测所使用的流动相A为0.1％甲酸/水溶液，所述水溶性维生素检测所使用的流动相B为甲醇；

所述脂溶性维生素使用Ultimate XB-C8 3.0×50mm 3.0μm的色谱柱进行检测，所述脂溶性维生素检测所使用的流动相A为0.1％甲酸/水溶液，所述脂溶性维生素检测所使用的流动相B为为0.2％甲酸/甲醇。