[发明专利]一种金属多酚改性的金银纳米粒子制备方法

说明书

本发明提供一种金属多酚改性的金银纳米粒子制备方法，涉及新型材料应用领域。本发明包括以下步骤：将2‑6 v/v%HAuCl₄(10 mM)滴加到1‑4 v/v%原花青素(5mM)和ddH2O的混合溶液中，加热下持续搅拌20分钟，得到紫红色的Au种子溶液；采用Au种子、HAuCl4水溶液、AgNO3溶液以及对苯二酚和聚乙烯吡咯烷酮在室温下制备支链AuAg NPs。本发明在光热抗菌的同时去除多余的ROS，改善了传统PTT加重炎症的缺点；抑制巨噬细胞M1极化并将其转化为M2表型，以恢复由细菌引起的免疫功能障碍，增强牙周胶原纤维的再生能力。

技术领域

本发明涉及一种纳米粒子制备方法，具体为一种金属多酚改性的金银纳米粒子制备方法，属于新型材料应用技术领域。

背景技术

目前牙周炎的治疗主要是通过机械清创技术辅助抗生素治疗清除细菌，治疗后的复发率和延迟愈合仍然很高。由于细菌感染是炎症最初阶段的主要原因，但宿主的免疫炎症反应进一步促进牙周炎的发展。因此，要彻底治疗牙周炎，除了清除病区的生物膜外，调节宿主免疫也是至关重要的。

光热剂有效吸收近红外区域的光，并将其转化为热能，可用于局部抗菌治疗。枝状的金银纳米粒子具有良好的光热性能。然而，产生的热量可以融化纳米颗粒突出的结构，因此，在颗粒表面涂上聚合物外壳可以有效地提高稳定性。金属-多酚网络具有合成简单、与人体组织亲和性好等独特优点，可以作为覆盖其他材料的生物涂层。传统的PTT治疗后往往导致炎症加重，本发明通过金属-多酚网络将抗菌与抗炎相结合，既可以达到PTT抗菌效果，又发挥出良好的抗炎作用，促进组织修复。

现有关于金属-多酚网络在纳米粒子生物医学领域的应用大多处在药物载体层面，对于其自身性质在疾病方面的治疗应用较少。金属-多酚具有抗氧化的研究潜力，对于目前的金属-多酚光热性能不理想的问题，本申请提出一种新的纳米粒子制备方式。

发明内容

（一）解决的技术问题

本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种金属多酚改性的金银纳米粒子制备方法，以解决现有技术中的问题。

（二）技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：1．一种金属多酚改性的金银纳米粒子制备方法，包括以下步骤：

Step1、将2-6 v/v% HAuCl4 (10 mM)滴加到1-4 v/v% 原花青素(5mM)和ddH2O的混合溶液中，加热下持续搅拌20分钟，得到紫红色的Au种子溶液；采用Au种子、HAuCl4水溶液、AgNO3溶液以及对苯二酚和聚乙烯吡咯烷酮在室温下制备支链AuAg NPs；

Step2、将1 mL AuAg NP分散液与50-150 μL 原花青素溶液(5 mM)旋涡混合10 s，加入15-45 μL FeCl3溶液(25 mM)搅拌10 s；随后，NaOH逐级添加以提高悬浮液的pH值至7.8；得到的mpn涂层的AuAg NPs被离心(6000 rpm, 5分钟)以收集沉淀物；最终的产品被称为AuAg@PC-Fe；

Step3、对材料的表征进行检测；

Step4、采用标准细胞计数Kit-8 (CCK8)法测定细胞活力，通过活/死细胞染色进一步评价AuAg@PC-Fe NPs的治疗效果；

Step5、利用2,2'-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐(ABTS)评价AuAg@PC-Fe NPs的抗氧化性能以及近红外对自由基清除效果的影响；

Step6、用808 nm激光照射AuAg和AuAg@PC-Fe 溶液(1 mL) 3分钟,利用3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑(MTT)、SYTO9/PI活/死菌双染色试剂和菌落计数法检测细菌活力；

采用定量聚合酶链式反应(qPCR)检测RAW 264.7细胞中M1表型相关因子信使RNA(mRNA)表达水平:IL-6、TNF-α、il -1β和M2表型相关因子Arg-1、IL-10、TNF-β；