[发明专利]α、β、γ-鹅膏毒肽的单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本申请涉及一种α、β、γ‑鹅膏毒肽的单克隆抗体及其制备方法和应用。所述α‑鹅膏毒肽的单克隆抗体由α‑鹅膏毒肽人工抗原制得，所述β‑鹅膏毒肽的单克隆抗体由β‑鹅膏毒肽人工抗原制得，所述γ‑鹅膏毒肽的单克隆抗体由γ‑鹅膏毒肽人工抗原制得；所述α‑鹅膏毒肽人工抗原为α‑鹅膏毒肽与钥孔血蓝蛋白的偶联物，所述β‑鹅膏毒肽人工抗原为β‑鹅膏毒肽与牛血清白蛋白的偶联物，所述γ‑鹅膏毒肽人工抗原为γ‑鹅膏毒肽与人血清白蛋白的偶联物。本申请的三种抗体之间具有较小的交叉反应率，可以同时检测并区分样品中的α‑AMA、β‑AMA、γ‑AMA，具有较高的准确度。

技术领域

本申请涉及食品安全检测技术领域，尤其涉及α、β、γ-鹅膏毒肽的单克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

在我国南方地区，由于地形、气候等条件，孕育了丰富的可食用野生菌资源，但由于有些毒蘑菇和可食用野生菌没有明显的形态特征差别，也缺乏快速可靠的毒蘑菇鉴别方法，导致因误食毒蘑菇而中毒死亡的事件频繁发生。因此，蘑菇食物中毒一直以来是我国重点关注的食品安全问题之一。

据统计，在误食毒蘑菇导致的中毒死亡事件中，高达70％的事件是因为误食剧毒鹅膏菌引起的。鹅膏菌的致死性毒素是鹅膏肽类毒素，根据其氨基酸组成和结构可以分为鹅膏毒肽、鬼笔毒肽和毒伞肽三类。其中，鹅膏毒肽是一种双环八肽，其化学性质十分稳定，一般的烹调加工无法破坏其毒性。因此，对鹅膏毒肽的检测尤为重要。

目前，鹅膏毒肽的检测方法主要有仪器分析方法和免疫学检测法；仪器分析方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)等，其具有灵敏度高、检测限低、重复性好等优点，但是上述方法存在检测时间长、操作繁琐以及仪器昂贵等问题，限制着其应用。免疫学检测法主要是基于抗原抗体之间的特异性反应原理而建立，其具有快速、操作简单、直观等特点适合现场的初步检测。

利用试纸条检测鹅膏毒肽时，通常一个试纸条仅能检测一类鹅膏毒肽，而不能很好的区分不同类型；这是因为抗体的特异性低，存在较大的交叉反应率。目前已分离鉴定的鹅膏毒肽有9类，其中，α-鹅膏毒肽(α-AMA)、β-鹅膏毒肽(β-AMA)、γ-鹅膏毒肽(γ-AMA)是导致死亡的主要毒素；但是在分别对α-AMA、β-AMA、γ-AMA进行检测时，检测时间较长，操作繁琐，导致检测效率较低；因此，如何能够快速地对鹅膏毒肽进行检测，并准确地判断出鹅膏毒肽的类型，对于后续的救治具有重要意义。

发明内容

为了解决上述技术问题，本申请提供一种α、β、γ-鹅膏毒肽的单克隆抗体及其制备方法和应用，本申请的α-鹅膏毒肽的单克隆抗体、β-鹅膏毒肽的单克隆抗体以及γ-鹅膏毒肽的单克隆抗体之间的交叉反应率低，可以同时对α-AMA、β-AMA、γ-AMA进行检测，具有检测效率高、灵敏度高以及交叉反应率低的优点。

第一方面，本申请提供一种α、β、γ-鹅膏毒肽的单克隆抗体，采用如下的技术方案：

一种α、β、γ-鹅膏毒肽的单克隆抗体，所述α-鹅膏毒肽的单克隆抗体由α-鹅膏毒肽人工抗原制得，所述β-鹅膏毒肽的单克隆抗体由β-鹅膏毒肽人工抗原制得，所述γ-鹅膏毒肽的单克隆抗体由γ-鹅膏毒肽人工抗原制得；

所述α-鹅膏毒肽人工抗原为α-鹅膏毒肽与钥孔血蓝蛋白的偶联物，所述β-鹅膏毒肽人工抗原为β-鹅膏毒肽与牛血清白蛋白的偶联物，所述γ-鹅膏毒肽人工抗原为γ-鹅膏毒肽与人血清白蛋白的偶联物。