[发明专利]α、β、γ-鹅膏毒肽的单克隆抗体及其制备方法和应用在审
申请号: | 202211314424.6 | 申请日: | 2022-10-31 |
公开(公告)号: | CN115594761A | 公开(公告)日: | 2023-01-13 |
发明(设计)人: | 刘红兵;马雪涛;谭建林;牛之瑞;方淑兵;栾杰;黄峻;刘阳;彭珍华 | 申请(专利权)人: | 青岛普瑞邦生物工程有限公司 |
主分类号: | C07K16/14 | 分类号: | C07K16/14;C07K14/765;C07K14/795;C12N5/20;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/58;G01N33/543;C12R1/91 |
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地址: | 266100 山东省青岛市高新*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 鹅膏毒肽 单克隆抗体 及其 制备 方法 应用 | ||
1.α、β、γ-鹅膏毒肽的单克隆抗体,其特征在于,所述α-鹅膏毒肽的单克隆抗体由α-鹅膏毒肽人工抗原制得,所述β-鹅膏毒肽的单克隆抗体由β-鹅膏毒肽人工抗原制得,所述γ-鹅膏毒肽的单克隆抗体由γ-鹅膏毒肽人工抗原制得;
所述α-鹅膏毒肽人工抗原为α-鹅膏毒肽与钥孔血蓝蛋白的偶联物,所述β-鹅膏毒肽人工抗原为β-鹅膏毒肽与牛血清白蛋白的偶联物,所述γ-鹅膏毒肽人工抗原为γ-鹅膏毒肽与人血清白蛋白的偶联物。
2.根据权利要求1所述的α、β、γ-鹅膏毒肽的单克隆抗体,其特征在于,所述α-鹅膏毒肽人工抗原通过戊二醛偶联α-鹅膏毒肽上的氨基和钥孔血蓝蛋白上的氨基得到。
3.根据权利要求1所述的α、β、γ-鹅膏毒肽的单克隆抗体,其特征在于,所述β-鹅膏毒肽人工抗原通过EDC、NHS活化β-鹅膏毒肽上的羧基,然后与牛血清白蛋白上的氨基结合后得到。
4.根据权利要求1所述的α、β、γ-鹅膏毒肽的单克隆抗体,其特征在于,所述γ-鹅膏毒肽人工抗原通过戊二醛偶联γ-鹅膏毒肽上的氨基和人血清白蛋白上的氨基得到。
5.一株分泌α-鹅膏毒肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其特征在于,所述杂交瘤细胞株被命名为AMA1,于2022年10月21日被保藏于中国典型培养物保藏中心;保藏地址:中国,武汉,武汉大学;保藏编号为CCTCCNO:C2022299。
6.一株分泌β-鹅膏毒肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其特征在于,所述杂交瘤细胞株被命名为AMA2,于2022年10月21日被保藏于中国典型培养物保藏中心;保藏地址:中国,武汉,武汉大学;保藏编号为CCTCCNO:C2022328。
7.一株分泌γ-鹅膏毒肽单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其特征在于,所述杂交瘤细胞株被命名为AMA3,于2022年10月21日被保藏于中国典型培养物保藏中心;保藏地址:中国,武汉,武汉大学;保藏编号为CCTCCNO:C2022329。
8.一种如权利要求1-4任意一项所述的α、β、γ-鹅膏毒肽的单克隆抗体的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
分别以α-鹅膏毒肽人工抗原、β-鹅膏毒肽人工抗原、γ-鹅膏毒肽人工抗原作为免疫原免疫健康小鼠;取免疫小鼠的脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞进行融合,筛选出阳性杂交瘤细胞株,经过抗体生产、纯化后,分别得到α-鹅膏毒的单克隆抗体、β-鹅膏毒肽的单克隆抗体和γ-鹅膏毒肽的单克隆抗体。
9.一种如权利要求1-4任意一项所述的α、β、γ-鹅膏毒肽的单克隆抗体的应用,其特征在于,所述α-鹅膏毒肽的单克隆抗体、β-鹅膏毒肽的单克隆抗体、所述γ-鹅膏毒肽的单克隆抗体用于制备检测α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽的试纸条或试剂盒。
10.根据权利要求9所述的α、β、γ-鹅膏毒肽的单克隆抗体的应用,其特征在于,所述试纸条包括底板和底板上沿层析方向依次连接的样品垫、结合垫、反应膜和吸水垫;
所述反应膜上沿层析方向依次设有用于检测γ-鹅膏毒肽的T3检测线、用于检测β-鹅膏毒肽的T2检测线、用于检测α-鹅膏毒肽的T1检测线和质控线;
所述T1检测线上包被有α-鹅膏毒肽人工抗原,所述T2检测线上包被有β-鹅膏毒肽人工抗原,所述T3检测线上包被有γ-鹅膏毒肽人工抗原;
所述结合垫上包被有α-鹅膏毒肽的单克隆抗体、β-鹅膏毒肽的单克隆抗体和γ-鹅膏毒肽的单克隆抗体。
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