[发明专利]一种基于伴侣蛋白GroEL保护的荧光金纳米簇、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种基于伴侣蛋白GroEL保护的荧光金纳米簇，其特征在于：是在100μLGroEL溶液中加入HAuCl₄水溶液，充分混匀，GroEL与HAuCl₄的用量摩尔比为10～15：6；然后加入20μL、1M的NaOH水溶液，充分混匀，GroEL蛋白解聚变性产生氨基酸将HAuCl₄中的金离子还原成金原子；再在50～70℃下反应1.5～3.0h，反应结束后用10kDa的透析袋于pH＝7.4的1×PBS中透析24h使蛋白复性，袋内液即为基于伴侣蛋白GroEL保护的荧光金纳米簇溶液。

2.如权利要求1所述的一种基于伴侣蛋白GroEL保护的荧光金纳米簇，其特征在于：首先取含有GroEL与RDPV质粒的大肠杆菌1～3mL，加入到含有50μg/mL卡那霉素与20μg/mL氯霉素双抗的100mL LB培养基中，37℃、220r/min过夜，再将其以1：200的体积比例接种于含上述双抗的1L LB培养基中，同时加入2g/LL-阿拉伯糖诱导菌体表达RDPV及GroEL，37℃、220r/min直到其OD600值达到0.6～0.8，再加入100μL、1mol/L IPTG，37℃、220r/min诱导表达14～16h；诱导表达后的菌种通过3000～5000r/min、25～30min离心进行收菌，然后加入8～12mL、pH7.4的PBS重悬于50mL离心管中；将得到的菌液按1：10的体积比加入裂菌液进行超声破碎，超声5s，间歇5s，超声有效时间为25～35min，超声破碎后于16000r/min离心20～30min，取上清液，加入饱和硫酸铵溶液，使上清液中硫酸铵的质量终浓度为30％；4℃搅拌1h，10000r/min离心25～35min，分离上清及沉淀，将沉淀用PBS等体积重悬，得到30％硫酸铵沉淀复溶样品；再在蔗糖密度梯度离心管中依次缓慢加入质量分数60％、50％、40％及30％的蔗糖溶液，每梯度2mL；取30％硫酸铵沉淀复溶样品加满离心管，配平后置于超速离心中，4℃、35000～40000r/min离心4h；将离心管上层GroEL溶液吸出，PBS透析除去蔗糖后利用AKTA纯化蛋白，得到纯化后的GroEL溶液。

3.如权利要求1所述的一种基于伴侣蛋白GroEL保护的荧光金纳米簇，其特征在于：GroEL与HAuCl₄的用量摩尔比为11：6。

4.权利要求1～3任何一项所述的一种基于伴侣蛋白GroEL保护的荧光金纳米簇在GroEL抑制剂筛选中的应用。