[发明专利]一种银杏DPP-Ⅳ抑制肽的制备方法

说明书

本发明公开了一种银杏DPP‑Ⅳ抑制肽的制备方法，将银杏脱壳、去皮后烘干，然后粉碎，过60目筛，采用石油醚浸泡脱脂后抽滤，干燥，得到脱脂银杏粉，将其加入到氯化钠溶液中进行提取，结束后离心收集上清液，往上清液中分批加入硫酸铵至其饱和度达70％～80％，静置过夜后离心，将所得沉淀透析、浓缩、冷冻干燥，得到银杏球蛋白，将其加入到去离子水中得到悬浮液，加入蛋白酶进行酶解，结束后沸水浴灭酶，通过截留分子量为1000Da的超滤膜过滤，收集滤液并冷冻干燥，即得。与现有技术相比，本发明方法高效、快速，过程易于控制，制备的银杏肽DPP‑Ⅳ抑制活性高、无毒副作用，相对分子质量较小，易被人体吸收。

技术领域

本发明涉及一种银杏DPP-Ⅳ抑制肽的制备方法，属于食品与生物技术领域。

背景技术

我国银杏资源丰富，产量较大，银杏干制品中蛋白含量丰富，银杏蛋白氨基酸组成合理，为优质植物蛋白，球蛋白和清蛋白为银杏蛋白的主要组分。目前，银杏大多作为干果销售，价格低廉，深加工产品较少，银杏市场需求未能有效拓展，导致产量过剩，供大于求，直接制约了我国银杏产业的进一步持续健康发展。因此，迫切需要研发银杏深加工产品，提高银杏的附加值。

食源性生物活性肽被认为是新一代的生物活性调节剂，主要来源于动物蛋白和植物蛋白，具有抗氧化、抗疲劳、调节免疫、降血压、降血脂和降血糖等广泛的生理功能。糖尿病及其并发症是严重危害人类健康的慢性疾病，预计到2045年，全球糖尿病患者将达到约7亿。二肽基肽酶-IV(dipeptidyl peptidase-IV，DPP-IV)是细胞表面的一种丝氨酸蛋白酶，抑制DPP-IV活性有利于控制血糖水平。目前临床上使用的西格列汀、利格列汀和沙格列汀等降血糖药物的作用机制都是靶向抑制DPP-IV活性，但这些药物往往伴随着一定副作用。食源性DPP-Ⅳ抑制肽由于其无毒副作用、安全性高，且对血糖正常者无降血糖作用，极具开发利用潜力。

迄今为止，已鉴定的DPP-IV食品蛋白衍生肽抑制剂尚未显示出与合成药物抑制剂同等的效力，因此需要进一步筛选新型DPP-Ⅳ抑制肽。银杏肽为银杏蛋白经过单酶或复酶水解后分离所得的低聚肽，已被证实具有抗氧化、降血脂、降血压、降血糖和肝保护等作用。评估了银杏球蛋白作为DPP-Ⅳ抑制肽来源的潜力，分析结果表明银杏球蛋白中含有大量的DPP-Ⅳ抑制肽片段，提示银杏球蛋白是DPP-Ⅳ抑制肽的优质蛋白来源。目前，有关银杏蛋白源DPP-Ⅳ抑制肽的制备未见报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有食源性DPP-Ⅳ抑制肽未显示出与合成药物抑制剂同等效力的问题，提供一种新型的银杏球蛋白源的DPP-Ⅳ抑制肽的制备方法，该方法制备的银杏肽具有较高的DPP-Ⅳ抑制活性，且制备工艺高效、快速，过程易于控制。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

一种银杏DPP-Ⅳ抑制肽的制备方法，包括如下步骤：

(1)将银杏脱壳、去皮后烘干，然后粉碎，过60目筛，得到银杏粉，将银杏粉加入到石油醚中浸泡脱脂，结束后抽滤，干燥，得到脱脂银杏粉；

(2)将脱脂银杏粉加入到氯化钠溶液中进行提取，结束后离心收集上清液，往上清液中分批加入硫酸铵至其饱和度达70％～80％，静置过夜后离心，将所得沉淀透析、浓缩、冷冻干燥，得到银杏球蛋白；

(3)将银杏球蛋白加入到去离子水中，混合均匀后得到悬浮液，加入蛋白酶进行酶解，结束后沸水浴灭酶，将得到的产物通过截留分子量为1000Da的超滤膜过滤，收集滤液并冷冻干燥，得到银杏DPP-Ⅳ抑制肽；

步骤(3)中，所述蛋白酶选自胃蛋白酶、菠萝蛋白酶或木瓜蛋白酶中的任意一种。

进一步，步骤(2)中，氯化钠溶液的质量浓度为8～12％，脱脂银杏粉和氯化钠溶液的质量体积比为1:15～1:20。

进一步，步骤(2)中，所述提取温度为55～60℃，提取时间为2～4h。