[发明专利]低成瘤性的MDCK细胞株及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种低成瘤性MDCK细胞株，其特征在于，所述MDCK细胞株的自噬相关基因被敲除。

2.根据权利要求1所述的低成瘤性MDCK细胞株，其特征在于，所述低成瘤性MDCK细胞株为MDCK-lc3KO细胞株，保藏编号为C2022288；或者

所述低成瘤性MDCK细胞株为MDCK-sqstm1KO细胞株，保藏编号为C2022289。

3.一种权利要求1所述的低成瘤性MDCK细胞株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

采用CRISPR Cas9基因编辑系统来敲除MDCK细胞中的自噬相关基因；

验证自噬相关基因敲除的MDCK细胞株的成瘤性。

4.根据权利要求3所述的低成瘤性MDCK细胞株的构建方法，其特征在于，所述自噬相关基因为lc3基因，针对lc3基因靶点序列为：GCCGGTCCGAGGGCATCGCG。

5.根据权利要求4所述的低成瘤性MDCK细胞株的构建方法，其特征在于，基于CRISPRCas9基因编辑系统来敲除lc3基因的gRNA序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2所示。

6.根据权利要求5所述的低成瘤性MDCK细胞株的构建方法，其特征在于，针对lc3基因敲除所构建的载体采用的5’同源臂和3’同源臂的序列如SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8所示。

7.根据权利要求3所述的低成瘤性MDCK细胞株的构建方法，其特征在于，所述自噬相关基因为sqstm1基因，针对sqstm1基因靶点序列为：CCATGCGCTCAGGAGGCACC。

8.根据权利要求7所述的低成瘤性MDCK细胞株的构建方法，其特征在于，基于CRISPRCas9基因编辑系统来敲除sqstm1基因的gRNA序列如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14所示。

9.根据权利要求8所述的低成瘤性MDCK细胞株的构建方法，其特征在于，针对sqstm1基因敲除所构建的载体采用的5’同源臂和3’同源臂的序列如SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.20所示。

10.权利要求1或2所述的低成瘤性MDCK细胞株在培养病毒中的应用。