[发明专利]一种多基因串联法构建生物合成褪黑素大肠杆菌工程菌的方法及应用

权利要求书

1.一种合成褪黑素的融合基因，其特征在于，所述融合基因包括mXcP4H、HsAADC、HsAANAT和HIOMT基因。

2.根据权利要求1所述融合基因，其特征在于，所述mXcP4H基因的核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示，HsAADC基因的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，HsAANAT基因的核苷酸序列如SEQID No.5所示，HIOMT基因的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示。

3.根据权利要求1或2所述融合基因，其特征在于，所述融合基因的各组成基因在进行融合前，还包括进行密码子优化，经密码子优化后的mXcP4H基因的核苷酸序列如SEQ IDNo.2所示，优化后的HsAADC基因的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，优化后的HsAANAT基因的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，优化后的HIOMT基因的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示。

4.一种包含权利要求3所述融合基因的表达盒，其特征在于，将每个经密码子优化后的基因分别与T7启动子和终止子融合，构建四个基因表达盒；

所述的T7启动子的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示，所述T7终止子的核苷酸序列如SEQID No.10。

5.一种包含权利要求4所述表达盒的多基因表达盒。

6.根据权利要求5所述多基因表达盒，其特征在于，所述多基因表达盒的连接顺序，从5’端至3’端为：经密码子优化后的mXcP4H表达盒、经密码子优化后的mXcP4H表达盒、经密码子优化后的HsAANAT表达盒和经密码子优化后的HIOMT表达盒。

7.一种包含权利要求5或6所述多基因表达盒的重组载体。

8.一种包含权利要求7所述重组载体的工程菌。

9.一种从L-色氨酸合成褪黑素的大肠杆菌工程菌，其特征在于，在所述大肠杆菌工程菌的基因组中包含权利要求7所述的重组载体。

10.利用权利要求9所述大肠杆菌工程菌从L-色氨酸合成褪黑素的方法，其特征在于，将所述大肠杆菌工程菌在增菌培养基中进行摇菌培养，得种子液；

将所述种子液接种到发酵培养基中进行发酵，发酵液中检测到褪黑素；

所述发酵时以L-色氨酸为发酵底物。