[发明专利]一种融合抗原GLuc-p30及其制备方法、试剂盒和检测方法

说明书

本发明提供一种融合抗原GLuc‑p30及其制备方法、试剂盒和检测方法，所述试剂盒包括：包被金黄色葡萄球菌A蛋白的酶标反应板、荧光素酶、融合抗原，非洲猪瘟抗体阳性血清，非洲猪瘟抗体阴性血清，荧光素酶底物、洗涤液，本发明通过慢病毒转导建立的稳定细胞株表达GLuc‑p30融合抗原，无需纯化，简化了抗原的准备过程，可以有效地检测样品中非洲猪瘟抗体，与符合国家标准非洲猪瘟抗体检测试剂盒的符合率达99％以上且有更好的检测灵敏性和特异性，具有广阔的市场前景和良好的经济、社会效益。

技术领域

本发明是关于一种血清学检测非洲猪瘟病毒抗体的方法，具体地说，是关于一种融合抗原GLuc-p30及其制备方法、试剂盒和检测方法，属于免疫检验技术领域。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fevervirus，ASFV)引起的猪的一种急性、烈性、高度接触性传染病，临床上以高热、网状内皮系统出血和高死亡率为特征。自2018年8月，非洲猪瘟蔓延至我国各省市，但目前又缺少商品化的非洲猪瘟疫苗，针对该疫情只能选择清群扑杀和封锁，对我国养猪业造成严重的经济损失。非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)属于双链DNA病毒目中的非洲猪瘟病毒科非洲猪瘟病毒属，也是该属的唯一成员。ASFV病毒颗粒含有囊膜并呈20面体对称，直径为175～215nm。ASFV基因组为末端共价闭合的单分子线状双链DNA，长度约170～190kb，末端碱基交互连接，形成发夹环。基因组含有约160～175个开放阅读框(ORF)，其中p30蛋白是其重要的结构蛋白之一，也是在病毒感染早期表达最多的蛋白。研究表明，p30蛋白有很强的免疫原性，是一种重要的非洲猪瘟病毒诊断抗原。

例如申请公布号为CN 111929433 A的中国发明专利，所述试剂盒的支持介质上包被有非洲猪瘟病毒抗原，所述非洲猪瘟病毒抗原为非洲猪瘟病毒p30和/或蛋白Δp54蛋白，其中非洲猪瘟病毒p30的制备过程繁琐，同时最后还需要层析纯化后使用，导致检测步骤复杂。

截至目前，我国未批准非洲猪瘟疫苗的上市使用。未经严格程序批准生产经营使用的疫苗都是假疫苗，安全风险隐患极大。因此，研发用于非洲猪瘟病毒抗体检测的试剂盒具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种非洲猪瘟病毒抗体检测试剂盒及其制备方法，目的在于提供一种敏感性高、特异性强、能够快速、简便地检测非洲猪瘟病毒p30抗体的LIPS检测方法。

一种融合蛋白GLuc-p30，所述融合蛋白GLuc-p30的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；SEQ ID No.1：

MGVKVLFALICIAVAEAKPTENNEDFNIVAVASNFATTDLDADRGKLPGKKLPLEVLKEMEANARKAGCTRGCLICLSHIKCTPKMKKFIPGRCHTYEGDKESAQGGIGEAIVDIPEIPGFKDLEPMEQFIAQVDLCVDCTTGCLKGLANVQCSDLLKKWLPQRCATFASKIQGQVDKIKGAGGDDYKDDDDKGSGDIMDFILNISMKMEVIFKTDLRSSSQVVFHAGSLYNWFSVEIINSGRIVTTAIKTLLSTVKYDIVKSARIYAGQGYTEHQAQEEWNMILHVLFEEETESSASSENIHEKNDNETNECTSSFETLFEQEPSSEVPKDSKLYMLAQKTVQHIEQYGKAPDFNKVIRAHNFIQTIYGTPLKEEEKEVVRLMVIKLLKKK。

其中，SEQ ID No.1由392个氨基酸组成，SEQ ID No.1的第199～392位氨基酸为ASFV p30抗原的氨基酸序列，SEQ ID No.1的第1～185位氨基酸为所述荧光素酶GLuc的氨基酸序列，SEQ ID No.1的186～198位氨基酸为连接肽的氨基酸序列。