[发明专利]蛋白包被的胶乳微球试剂及包被方法

说明书

本发明提供了一种蛋白包被的胶乳微球试剂及包被方法。其中，该包被方法包括：采用混合活化剂对胶乳微球进行活化反应，得到活化微球；采用偶联缓冲液稀释活化微球和蛋白，分别得到稀释活化微球和稀释蛋白；将稀释活化微球与稀释蛋白进行偶联反应，得到偶联复合物；对偶联复合物依次进行封闭及储存处理，得到蛋白包被的胶乳微球溶液；其中，偶联缓冲液选自如下任意一种：硼砂缓冲液、磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲液及MOPS缓冲液；混合活化剂为EDC和Sulfo‑NHS的混合溶液。该方法解决了现有工艺制备的胶乳微球偶联抗体或抗原相关试剂放大生产后不稳定的问题。

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂制备领域，具体而言，涉及一种蛋白包被的胶乳微球试剂及包被方法。

背景技术

胶乳免疫比浊法是体外诊断领域中有较高技术瓶颈的一种检测方法，其基本原理为将待测物质相对应的抗原/抗体包被在一定大小的胶乳颗粒上，加入待检测样本后，相应抗体/抗原与微球上抗原/抗体结合，发生凝集，单个胶乳颗粒在入射光波长之内，光线可透过，当两个胶乳凝集时，则使透过光减少，这种减少的程度与胶乳凝集成正比，也就是与待测抗原/抗体量成正比，从而提高试验的敏感性。

该方法学的主要的难点之一在于抗原或抗体和胶乳微球的偶联。常规的偶联方法有物理吸附法和化学偶联法，其中物理吸附法受限于缓冲液体系的影响，稳定性不佳，因此现在主流的偶联方法为化学偶联。化学偶联法是通过化合键将微球上的基团和抗原/抗体上的基团连接在一起，形成稳定的复合物。

目前市面上常用的化学偶联法有常规的一步法工艺和两步法工艺，其中一步法工艺是将胶乳微球、活化剂和抗原/抗体处于同一溶液中进行反应，将抗原/抗体偶联到羧基胶乳微球上面，但是该方法容易造成微球的团聚、降低抗体的使用率，并且需要在偶联、封闭结束后离心去除未结合上微球的抗体和活化剂，工艺耗时较长。两步法工艺是将活化和偶联过程进行分开，先将微球用一种活化剂进行活化，活化后离心去除多余的活化剂，然后再与抗体进行偶联，待偶联、封闭结束后再次进行离心储存，工艺比较复杂，限制了放大生产试剂的稳定性。

因此，亟需一种包被工艺能够在节约成本，提高试剂的生产效率同时，控制试剂的稳定性，保证产品性能。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种蛋白包被的胶乳微球试剂及包被方法，以解决现有工艺制备的胶乳微球偶联抗体或抗原相关试剂批次间稳定性差的问题。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种胶乳微球的包被方法，该包被方法包括：采用混合活化剂对胶乳微球进行活化反应，得到活化微球；采用偶联缓冲液稀释活化微球和蛋白，分别得到稀释活化微球和稀释蛋白；将稀释活化微球与稀释蛋白进行偶联反应，得到偶联复合物；对偶联复合物依次进行封闭及储存处理，得到蛋白包被的胶乳微球溶液；其中，偶联缓冲液选自如下任意一种：硼砂缓冲液、磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲液及MOPS缓冲液；混合活化剂为EDC和Sulfo-NHS的混合溶液。

进一步地，采用混合活化剂对胶乳微球进行活化反应，得到活化微球包括：将羧基胶乳微球置于活化缓冲液中，得到微球溶液；按羧基胶乳微球：EDC:Sulfo-NHS＝10:(0.15-1):(0.15-1)的质量比，优选地为10:(0.5-0.75):(0.5-0.75)，将微球溶液与混合活化剂混合后进行活化反应，不经离心，得到活化微球；优选地，微球溶液与混合活化剂混合后，羧基胶乳微球的终浓度为2％～8％(m/m)。

进一步地，活化缓冲液为MES缓冲液，更优选MES缓冲液的离子强度为20～100mM，更优选MES缓冲液的pH为5.8-6.4；进一步优选活化缓冲液为50mM pH6.0的MES缓冲液。

进一步地，在搅拌条件下进行活化反应，更优选搅拌的转速为100～500rpm；优选地，活化反应持续20～60min。