[发明专利]蛋白包被的胶乳微球试剂及包被方法

权利要求书

1.一种胶乳微球的包被方法，其特征在于，所述包被方法包括：

采用混合活化剂对胶乳微球进行活化反应，得到活化微球；

采用偶联缓冲液稀释所述活化微球和蛋白，分别得到稀释活化微球和稀释蛋白；

将所述稀释活化微球与所述稀释蛋白进行偶联反应，得到偶联复合物；

对所述偶联复合物依次进行封闭及储存处理，得到蛋白包被的胶乳微球溶液；

其中，所述偶联缓冲液选自如下任意一种：硼砂缓冲液、磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲液及MOPS缓冲液；

所述混合活化剂为EDC和Sulfo-NHS的混合溶液。

2.根据权利要求1所述的包被方法，其特征在于，采用混合活化剂对胶乳微球进行活化反应，得到活化微球包括：

将羧基胶乳微球置于活化缓冲液中，得到微球溶液；

按所述羧基胶乳微球:所述EDC:所述Sulfo-NHS＝10:(0.15-1):(0.15-1)的质量比，优选地为10:(0.5-0.75):(0.5-0.75)，将所述微球溶液与所述混合活化剂混合后进行所述活化反应，不经离心，得到所述活化微球；

优选地，所述微球溶液与所述混合活化剂混合后，所述羧基胶乳微球的终浓度为2％～8％(m/m)。

3.根据权利要求2所述的包被方法，其特征在于，所述活化缓冲液为MES缓冲液，更优选所述MES缓冲液的离子强度为20～100mM，更优选所述MES缓冲液的pH为5.8-6.4；进一步优选活化缓冲液为50mM pH6.0的MES缓冲液。

4.根据权利要求2所述的包被方法，其特征在于，在搅拌条件下进行所述活化反应，更优选搅拌的转速为100～500rpm；

优选地，所述活化反应持续20～60min。

5.根据权利要求1所述的包被方法，其特征在于，所述偶联缓冲液的离子强度为20mM～100mM，更优选所述偶联缓冲液的pH为7.8-8.6；

进一步优选地，所述偶联缓冲液为65.5mM pH8.2的硼砂缓冲液。

6.根据权利要求5所述的包被方法，其特征在于，所述稀释活化微球中，所述羧基胶乳微球的浓度为1％～4％(m/m)；

优选地，按照所述羧基胶乳微球：所述蛋白的质量比＝(40-2):1的比例进行所述偶联反应，得到所述偶联复合物；

优选地，所述羧基胶乳微球的偶联浓度为1％～3％；

优选地，所述偶联反应持续的时间为1.5h～24h。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的包被方法，其特征在于，对所述偶联复合物依次进行封闭及储存处理，得到蛋白包被的胶乳微球溶液包括：

在搅拌条件下，将所述偶联复合物与封闭缓冲液等体积混合以进行所述封闭，不经离心，得到封闭混合液，并向所述封闭混合液中添加储存缓冲液，得到所述蛋白包被的胶乳微球溶液；

优选地，所述搅拌的转速为100-500rpm；

优选地，所述封闭缓冲液为含1％BSA的所述储存缓冲液；

优选地，所述封闭持续时间为0.5～1h；

优选地，所述储存缓冲液包括pH7.4 Tris 12.1g/L、氯化钠10g/L、叠氮钠1.0g/L、吐温20 0.5ml/L及BSA 1g/L；

优选地，所述蛋白包被的胶乳微球溶液中，所述蛋白包被的胶乳微球的终浓度为0.1％～0.5％。

8.根据权利要求1所述的包被方法，其特征在于，所述蛋白为抗原或抗体；

优选地，所述蛋白选自如下任意一种抗原或其抗体：半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、α1微球蛋白及抗链球菌溶血素“O”。

9.一种蛋白包被的胶乳微球试剂，其特征在于，所述蛋白包被的胶乳微球通过权利要求1-8中任一项所述的包被方法包被得到。

10.根据权利要求9所述的蛋白包被的胶乳微球试剂，其特征在于，所述蛋白包被的胶乳微球试剂中含有如下任意一种或多种成分：EDC降解产物、Sulfo-NHS、MES以及所述偶联缓冲液中的相关组分。