[发明专利]检测抗性看麦娘的特异性引物组及其LAMP试剂盒以及方法

说明书

本发明涉及一种检测抗性看麦娘的特异性引物组及其LAMP试剂盒以及方法；该检测抗性看麦娘的特异性引物组包括由正向外引物F3和反向外引物B3组成的第一特异性引物对，以及由正向内引物FIP和反向内引物BIP组成的第二特异性引物对。本发明的特异性引物组可用于抗性看麦娘的LAMP检测，本发明提供的LAMP检测方法可以特异性的检测含有Ile‑2041‑Asn突变的抗性看麦娘，可用于检测田间抗性看麦娘种群，从而及时发现田间是否存在抗性看麦娘种群，控制田间抗性看麦娘种群的蔓延。同时，本发明的特异性引物组可制备成LAMP试剂盒，使用方便。

技术领域

本发明涉及农业科学技术领域，特别是涉及检测抗性看麦娘的特异性引物组及其LAMP试剂盒以及方法。

背景技术

看麦娘(Alopecurus aequalis Sobol.)是农田常见的一年生恶性杂草之一，其产籽量大、成株率高、对逆境环境具有较强适应能力，对小麦、油菜等作物危害严重，能够导致其大量减产。精噁唑禾草灵(fenoxaprop-P-ethyl)是防治看麦娘的主导药剂，然而长期单一使用精噁唑禾草灵，不仅会使看麦娘对精噁唑禾草灵逐渐产生抗药性，甚至对其它药剂也会表现出交互抗性。研究发现除草剂靶标酶基因ACCase发生抗性突变是导致看麦娘产生抗药性的重要原因，其中Ile-2041-Asn突变是导致看麦娘对精噁唑禾草灵等除草剂产生抗性的主要突变形式之一。

为了控制田间抗性看麦娘种群的蔓延，需要及时发现田间是否存在抗性看麦娘的种群，然而，目前抗性看麦娘的检测方法主要依赖于传统的基因扩增和测序，其需要昂贵的PCR(聚合酶链式反应)仪器，过程繁琐、耗时较长、灵敏度低，而且测试结果容易受到具有Ile-2041-Asn突变的其他种类杂草的影响。

发明内容

基于此，有必要针对上述问题，提供一种检测抗性看麦娘的特异性引物组及其LAMP试剂盒以及方法；该特异性引物组能够快速且特异性的检测出具有Ile-2041-Asn突变的抗性看麦娘，并且操作简便，灵敏度高，价格低廉。

本发明提供了一种检测抗性看麦娘的特异性引物组，所述特异性引物组包括由正向外引物F3和反向外引物B3组成的第一特异性引物对，以及由正向内引物FIP和反向内引物BIP组成的第二特异性引物对，其中，

所述正向外引物F3的核苷酸序列为：5’GAGGGATTCCTGTTGGTGTT3’；

所述反向外引物B3的核苷酸序列为：5’TTAGCTTCAAAAAGATCTCTTTGTCC3’；

所述正向内引物FIP的核苷酸序列为：5’GGAACAGACCGCTCATGGGAACCATGATGCAGCTCGTCC3’；

所述反向内引物BIP的核苷酸序列为：5’TCTGCTACCAAGACAGCGCAGGCCTCTCCAGTTAGCAAGG3’。

一种检测抗性看麦娘的LAMP试剂盒，所述LAMP试剂盒包括所述的特异性引物组。

在一实施方式中，所述第一特异性引物对与所述第二特异性引物对的质量比为1:50-5:4。

在一实施方式中，所述LAMP试剂盒中，正向内引物FIP的浓度为35μmol/L-45μmol/L，反向内引物BIP的浓度为35μmol/L-45μmol/L，正向外引物F3的浓度为3μmol/L-7μmol/L，反向外引物B3的浓度为3μmol/L-7μmol/L。

在一实施方式中，所述LAMP试剂盒中还包括有10×扩增缓冲液、dNTP、MgSO₄、BstDNA聚合酶、甜菜碱、基因组DNA和水。

一种抗性看麦娘的检测方法，包括以下步骤：

提取待测样品的基因组DNA，作为模板DNA；