[发明专利]检测抗性看麦娘的特异性引物组及其LAMP试剂盒以及方法

权利要求书

1.一种检测抗性看麦娘的特异性引物组，其特征在于，所述特异性引物组包括由正向外引物F3和反向外引物B3组成的第一特异性引物对，以及由正向内引物FIP和反向内引物BIP组成的第二特异性引物对，其中，

所述正向外引物F3的核苷酸序列为：5’GAGGGATTCCTGTTGGTGTT3’；

所述反向外引物B3的核苷酸序列为：5’TTAGCTTCAAAAAGATCTCTTTGTCC3’；

所述正向内引物FIP的核苷酸序列为：5’GGAACAGACCGCTCATGGGAACCATGATGCAGCTCGTCC3’；

所述反向内引物BIP的核苷酸序列为：5’TCTGCTACCAAGACAGCGCAGGCCTCTCCAGTTAGCAAGG3’。

2.一种检测抗性看麦娘的LAMP试剂盒，其特征在于，所述LAMP试剂盒包括如权利要求1所述的特异性引物组。

3.根据权利要求2所述的检测抗性看麦娘的LAMP试剂盒，其特征在于，所述第一特异性引物对与所述第二特异性引物对的质量比为1:50-5:4。

4.根据权利要求2所述的检测抗性看麦娘的LAMP试剂盒，其特征在于，所述LAMP试剂盒中，正向内引物FIP的浓度为35μmol/L-45μmol/L，反向内引物BIP的浓度为35μmol/L-45μmol/L，正向外引物F3的浓度为3μmol/L-7μmol/L，反向外引物B3的浓度为3μmol/L-7μmol/L。

5.根据权利要求2-4任一项所述的检测抗性看麦娘的LAMP试剂盒，其特征在于，所述LAMP试剂盒中还包括有10×扩增缓冲液、dNTP、MgSO₄、Bst DNA聚合酶、甜菜碱、基因组DNA和水。

6.一种抗性看麦娘的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

提取待测样品的基因组DNA，作为模板DNA；

将所述模板DNA与如权利要求1所述的特异性引物组配置形成LAMP反应体系，或者，将所述模板DNA与如权利要求2-5任一项所述的LAMP试剂盒配置形成LAMP反应体系；

使所述LAMP反应体系进行扩增反应，得到扩增产物；

将所述扩增产物进行凝胶电泳，根据条带分析结果，或者，向所述扩增产物中加入荧光染料得到反应产物，根据所述反应产物的RGB值分析结果。

7.根据权利要求6所述的抗性看麦娘的检测方法，其特征在于，以25μL的所述LAMP反应体系的体积计，其中，包括浓度为90mmol/L-110mmol/L的所述MgSO₄，3mol/L-5mol/L的所述甜菜碱，5μmol/L-40μmol/L的所述特异性引物组，4U-16U的所述Bst DNA聚合酶，0.5μL-1.5μL的所述模板DNA，1μL-5μL的所述10×扩增缓冲液，余量为水。

8.根据权利要求6或7所述的抗性看麦娘的检测方法，其特征在于，使所述LAMP反应体系进行扩增反应的步骤中，温度为60℃-65℃，时间为45min-60min，或，分两个阶段进行，第一阶段的温度为60℃-65℃，时间为45min-60min；第二阶段的温度为80℃，时间为10min。

9.根据权利要求6或7所述的抗性看麦娘的检测方法，其特征在于，向所述扩增产物中加入荧光染料的步骤中，每毫升扩增产物中加入0.01mL-0.02mL的荧光染料。

10.根据权利要求6或7所述的抗性看麦娘的检测方法，其特征在于，所述荧光染料选自SYBR Green I、HNB或钙黄绿素中的至少一种。