[发明专利]高效生物合成苯丙酮酸及4-羟基苯丙酮酸衍生物的方法

权利要求书

1.高效生物合成苯丙酮酸及4-羟基苯丙酮酸衍生物的方法，其特征在于：使用RED重组的方法将大肠杆菌合成苯丙氨酸的基因tyrB、aspC和ilvE，合成酪氨酸的基因tyrA和将编码丙酮酸激酶的基因pykA和pykF进行敲除，改造成苯丙酮酸及4-羟基苯丙酮酸衍生物生产的优良宿主，并在优良宿主中进行发酵实验从头合成产物(1)苯甲醇，产物(2)苯乙醇，产物(3)尿黑酸和产物(4)酪醇。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，四种产物的合成路径所涉及的酶分别为：产物(1)分支酸变位酶(pheA)，4-羟基扁桃酸合酶(hmaS)，S-扁桃酸脱氢酶(mdlB)和苯甲酰甲酸脱羧酶(mdlC)；产物(2)氨基酸脱羧酶(aro10)和乙醇脱氢酶(adh6)；产物(3)4-羟基苯丙酮酸双加氧酶(HPPD)和解除反馈抑制的预苯酸脱氢酶(tyrA^fbr)；产物(4)氨基酸脱羧酶(aro10)，乙醇脱氢酶(adh6)和解除反馈抑制的预苯酸脱氢酶(tyrA^fbr)。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，合成路径所涉及的酶来源于细菌，真菌或蛋白质工程改造，分支酸变位酶(pheA)，4-羟基扁桃酸合酶(hmaS)，S-扁桃酸脱氢酶(mdlB)，苯甲酰甲酸脱羧酶(mdlC)，氨基酸脱羧酶(aro10)，乙醇脱氢酶(adh6)，4-羟基苯丙酮酸双加氧酶(HPPD)，和解除反馈抑制的预苯酸脱氢酶(tyrA^fbr)的基因。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，宿主为大肠杆菌。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，生物合成路径在宿主的基因表达元件为下述1)，2)，3)和4)中的一种。

1)表达合成苯甲醇的途径，来源于细菌，真菌或蛋白质工程改造，编码分支酸变位酶(pheA)，4-羟基扁桃酸合酶(hmaS)，S-扁桃酸脱氢酶(mdlB)及苯甲酰甲酸脱羧酶(mdlC)的基因；

2)表达合成苯乙醇的途径，来源于细菌，真菌或蛋白质工程改造，编码氨基酸脱羧酶(aro10)和乙醇脱氢酶(adh6)的基因；

3)表达合成尿黑酸的途径，来源于细菌，真菌或蛋白质工程改造，编码4-羟基苯丙酮酸双加氧酶(HPPD)的基因和解除反馈抑制的预苯酸脱氢酶(tyrA^fbr)的基因；

4)表达合成酪醇的途径，来源于细菌，真菌或蛋白质工程改造，编码解除反馈抑制的预苯酸脱氢酶(tyrA^fbr)，氨基酸脱羧酶(aro10)和乙醇脱氢酶(adh6)的基因。