[发明专利]靶向人源PI3Kβ第962位酪氨酸磷酸化的兔多克隆抗体及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种靶向人源PI3Kβ第962位酪氨酸磷酸化的兔多克隆抗体，其特征在于，所述PI3Kβ第962位酪氨酸磷酸化的兔多克隆抗体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述PI3Kβ第962位酪氨酸磷酸化的兔多克隆抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一种如权利要求1所述的靶向人源PI3Kβ第962位酪氨酸磷酸化的兔多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、合成包括第962位酪氨酸磷酸化位点的抗原肽，抗原肽C端末端与半胱氨酸连接，并偶连钥孔血蓝蛋白载体蛋白作为完全抗原；

S2、将S1中的完全抗原与佐剂联合作用于免疫动物后收集血清，得到抗血清；

S3、将S2中的抗血清进行纯化，得到PI3KβY962磷酸化抗体。

3.根据权利要求2所述的一种靶向人源PI3Kβ第962位酪氨酸磷酸化的兔多克隆抗体的制备方法，其特征在于，在S1中，所述抗原肽为ILT(Y-p)DFIH-C。

4.根据权利要求2所述的一种靶向人源PI3Kβ第962位酪氨酸磷酸化的兔多克隆抗体的制备方法，其特征在于，在S2中，所述佐剂为弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂，所述免疫动物为试验级日本大耳白兔。

5.根据权利要求2所述的一种靶向人源PI3Kβ第962位酪氨酸磷酸化的兔多克隆抗体的制备方法，其特征在于，在S3中，抗血清纯化方法为：首先以交联有磷酸化多肽的亲和层析柱进行亲和纯化，以交联有非磷酸化多肽的亲和层析柱去除与相应非磷酸多肽有交叉反应的抗体成分，然后以钥孔血蓝蛋白交联的亲和层析柱去除其中针对钥孔血蓝蛋白载体蛋白的抗体成分，最后通过透析、浓缩去除其中的非抗体蛋白成分，最终获得纯化的PI3KβY962磷酸化抗体。

6.一种如权利要求1所述的靶向人源PI3Kβ第962位酪氨酸磷酸化的兔多克隆抗体的应用，其特征在于，所述靶向人源PI3Kβ第962位酪氨酸磷酸化的兔多克隆抗体作为判断PTEN缺失肿瘤的标志物。

7.根据权利要求6所述的靶向人源PI3Kβ第962位酪氨酸磷酸化的兔多克隆抗体的应用，其特征在于，所述靶向人源PI3Kβ第962位酪氨酸磷酸化的兔多克隆抗体特异性检测细胞中内源性PI3KβY962位点的磷酸化水平。

8.根据权利要求7所述的一种靶向人源PI3Kβ第962位酪氨酸磷酸化的兔多克隆抗体的应用，其特征在于，所述靶向人源PI3Kβ第962位酪氨酸磷酸化的兔多克隆抗体用于PTEN缺失的人类三阴性乳腺癌细胞BT549中Y962位点磷酸化的PI3Kβ蛋白免疫荧光检测。

9.根据权利要求7所述的一种靶向人源PI3Kβ第962位酪氨酸磷酸化的兔多克隆抗体的应用，其特征在于，所述靶向人源PI3Kβ第962位酪氨酸磷酸化的兔多克隆抗体用于PTEN缺失的人类前列腺癌细胞PC3回补PI3Kβ后，Y962位点磷酸化的PI3Kβ蛋白免疫荧光检测。

10.根据权利要求7所述的一种靶向人源PI3Kβ第962位酪氨酸磷酸化的兔多克隆抗体的应用，其特征在于，所述靶向人源PI3Kβ第962位酪氨酸磷酸化的兔多克隆抗体分别用于PTEN正常和PTEN缺失的人类三阴性乳腺癌细胞BT549中Y962位点磷酸化的PI3Kβ蛋白、PTEN与c-Myc的多色免疫荧光检测。