[发明专利]用于草莓腐霉根腐病病原菌的致病性鉴定的接种方法

权利要求书

1.用于草莓腐霉根腐病病原菌的致病性鉴定的接种方法，其特征在于包括以下步骤：

1)、将作为致病菌的腐霉类病原菌菌株置于培养基上培养后，于菌落边缘取菌丝块；

2)、接种容器及草莓苗选择：

取直径为9～10mm的滤纸片对折后再对折放入直径为5～6cm、高为10cm的玻璃瓶中，加入5～6ml的蒸馏水；选取草莓匍匐茎繁殖所得的高7～8cm的小苗，放置于瓶内滤纸片上；然后于人工培养箱中进行培养2～3d，培养条件为：人工培养箱中设定黑暗(26±0.5)℃/白天(30±0.5)℃的循环，每个玻璃瓶中每天加入3～4ml蒸馏水，从而确保草莓根尖处在蒸馏水中；

3)、接种：

将步骤1)所得的菌丝块倒扣放置于草莓根茎部进行接种作为处理组，将菌丝块改成同样大小的培养基块作为对照组；

4)、培养：

将处理组和对照组放入人工培养箱中进行培养；

接种48h后取出处理组中的菌丝块以及对照组中的培养基块，继续进行培养；

培养条件均同步骤2)；

从接种后24h开始每过24h进行致病性观察与记录。

2.根据权利要求1所述的用于草莓腐霉根腐病病原菌的致病性鉴定的接种方法，其特征在于：所述步骤2)的小苗为未定植于基质的健康小苗。

3.根据权利要求2所述的用于草莓腐霉根腐病病原菌的致病性鉴定的接种方法，其特征在于所述步骤2)中：

黑暗、白天的时间分别为12小时；白天的光照强度为2000～3000lx。

4.根据权利要求3所述的用于草莓腐霉根腐病病原菌的致病性鉴定的接种方法，其特征在于：

所述步骤4)中的致病性观察与记录为：每天观察记录植株状况，等处理组的草莓植株全株萎蔫取出，切开茎基部观察及判定致病性。

5.根据权利要求1～4任一所述的用于草莓腐霉根腐病病原菌的致病性鉴定的接种方法，其特征在于所述步骤1)为：

将作为致病菌的腐霉类病原菌菌株置于PDA培养基上于30±1℃培养3天后，于菌落边缘取菌丝块；

步骤3)对照组中所用为与菌丝块同样大小的PDA培养基块。

6.根据权利要求5所述的用于草莓腐霉根腐病病原菌的致病性鉴定的接种方法，其特征在于：腐霉类病原菌为旋柄腐霉(phytopythium helicoides)。

7.根据权利要求6所述的用于草莓腐霉根腐病病原菌的致病性鉴定的接种方法，其特征在于，旋柄腐霉(phytopythium helicoides)的菌株分离纯化和鉴定为：

从田间采集根腐病的草莓病株，水洗草莓根茎基部，用刀片切掉茎基部外表皮，放在75％乙醇中浸泡45～60s后，用无菌水洗1～2次，之后用灭菌刀片在病健交界处取大小为5mm*5mm*5mm的茎组织块置于PDA培养基上28℃培养，待长出菌落；获得纯培养后形态观察及18s测序比对确定致病菌为旋柄腐霉(phytopythium helicoides)；

18s测序比对的序列如SEQ ID NO:1。