[发明专利]MDCK细胞成瘤性检测方法在审
| 申请号： | 202211105813.8 | 申请日： | 2022-09-09 |
| 公开（公告）号： | CN116287156A | 公开（公告）日： | 2023-06-23 |
| 发明（设计）人： | 杨晓明;王辉;梁宏阳;李莉莉;赵玉秀;薄存沛;于守智;赵雪;董晓飞;郭莹莹;王晴 | 申请（专利权）人： | 北京生物制品研究所有限责任公司 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686;C12Q1/6888;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京三友知识产权代理有限公司 11127 | 代理人： | 肖轶;褚瑶杨 |
| 地址： | 100176 北京市大兴区北京经*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | mdck 细胞 成瘤性 检测 方法 | ||
1.一种用于检测MDCK细胞成瘤性的引物组，该引物组包含：
正向引物，所述正向引物包含SEQ ID NO.1的序列；和
反向引物，所述反向引物包含SEQ ID NO.2的序列。
2.如权利要求1所述的引物组，其中，所述正向引物的序列是在SEQ ID NO.1的序列的5’端和/或3’端添加和/或缺失1至4个碱基得到的序列；优选地，所述正向引物的序列是SEQID NO.1。
3.如权利要求1或2所述的引物组，其中，所述反向引物的序列是在SEQ ID NO.2的序列的5’端和/或3’端添加和/或缺失1至4个碱基得到的序列；优选地，所述反向引物的序列是SEQ ID NO.2。
4.一种用于检测MDCK细胞成瘤性的引物组，该引物组包含：
正向引物，所述正向引物包含SEQ ID NO.3的序列；和
反向引物，所述反向引物包含SEQ ID NO.4的序列。
5.如权利要求4所述的引物组，其中，所述正向引物的序列是在SEQ ID NO.3的序列的5’端和/或3’端添加和/或缺失1至4个碱基得到的序列；优选地，所述正向引物的序列是SEQID NO.3。
6.如权利要求4或5所述的引物组，其中，所述反向引物的序列是在SEQ ID NO.4的序列的5’端和/或3’端添加和/或缺失1至4个碱基得到的序列；优选地，所述反向引物的序列是SEQ ID NO.4。
7.一种用于检测MDCK细胞成瘤性的试剂盒，所述试剂盒包含权利要求1至6中任一项所述的引物组。
8.权利要求1至6中任一项所述的引物组或权利要求7所述的试剂盒在检测MDCK细胞成瘤性中的应用。
9.一种用于检测MDCK细胞成瘤性的方法，所述方法包括：
1)培养MDCK细胞并提取细胞总RNA；
2)对所述细胞总RNA进行反转录，得到cDNA；
3)将所述cDNA与权利要求1至6中任一项所述的引物组混合，并进行荧光定量PCR(qPCR)；和
4)对qPCR数据进行分析以确定所述MDCK细胞的成瘤性。
10.如权利要求9所述的方法，其中，在步骤3)的qPCR中使用的cDNA浓度为5pg/μL～10ng/μL，优选为10pg/μL。
11.如权利要求9或10所述的方法，其中，所述正向引物和所述反向引物的浓度分别为0.1μM至1.0μM，优选地为0.25μM。
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