[发明专利]一种检测SRY基因的物质及对猪、山羊、牛进行性别鉴定的PCR检测方法

说明书

本发明提供了一种检测SRY基因的物质及对猪、山羊、牛进行性别鉴定的PCR检测方法，检测SRY基因的物质为检测SRY基因的通用引物，其包含上游引物SRY‑F、下游引物SRY‑R，上游引物SRY‑F的碱基序列如SEQIDNO.1所示，具体为：5′‑TGCTTCTGCTATGTTCAG‑3′；下游引物SRY‑R的碱基序列如SEQIDNO.2所示，具体为：5′‑GTTCATGGGTCGCTTGAC‑3′。本发明还提供了一种对猪、山羊、牛进行性别鉴定的试剂盒。本发明的优势在于：实现了用1对引物在以上3个物种中鉴别公母，快速、准确，且不受环境条件因素影响。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种检测SRY基因的物质及对猪、山羊、牛进行性别鉴定的PCR检测方法。

背景技术

SRY(sex determining region Y,SRY)基因是人和动物性别的决定基因，其在雄性哺乳动物生殖器官-睾丸的发育过程中起到关键作用，因此，SRY基因又被称作睾丸决定因子(testis determining factor,TDF)。

SRY基因位于哺乳动物的Y染色体上，Y染色体在正常情况下存在于雄性个体，因此，SRY基因作为雄性特异性基因，可用于鉴别哺乳动物的性别。此外，还可以通过SRY基因评估哺乳动物种群的遗传多样性。

目前，有文章报道通过PCR扩增SRY基因的方法鉴定猪、牛等家畜的性别，但大部分都是根据单个物种SRY基因序列设计的引物，且只能检测一个物种，尚无可鉴定多个物种性别的通用引物。少数专利文献提供的引物可鉴定多个物种的性别，但设计的引物并不能和常见的家畜物种的SRY基因序列完全匹配，发生错配后，在实际应用时很可能影响检测效率。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测SRY基因的物质及对猪、山羊、牛进行性别鉴定的PCR检测方法，实现了用1对引物在猪、山羊、牛共3个物种中鉴别公母，检测方法快速、准确，且不受环境条件因素影响。

本发明具体方案如下：一种检测SRY基因的物质，用于对猪、山羊、牛进行性别鉴定的产品中，检测SRY基因的物质为检测SRY基因的通用引物，检测SRY基因的通用引物包含上游引物SRY-F、下游引物SRY-R，上游引物SRY-F的碱基序列具体为：5′-TGCTTCTGCTATGTTCAG-3′；下游引物SRY-R的碱基序列具体为：5′-GTTCATGGGTCGCTTGAC-3′。

本发明还提供了一种对猪、山羊、牛进行性别鉴定的试剂盒，包括检测SRY基因的物质。

进一步地，对猪、山羊、牛进行性别鉴定的试剂盒，还包括PCR反应试剂和DNA提取试剂。

本发明还提供了一种利用以上试剂盒对猪、山羊、牛进行性别鉴定的PCR检测方法，包括下述步骤：

S1、分别提取待测样品基因组DNA，通过1.5％琼脂糖凝胶电泳对提取的DNA样品进行检测，确定DNA的完整性和质量，备用；

S2、以提取的基因组DNA为PCR扩增模板，利用上述检测SRY基因的物质进行PCR扩增反应；

S3、PCR扩增结束后，通过2％琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行检测，判定方法为：能够扩增出187bp目的片段的样本为公家畜DNA，无目的片段扩增的样本为母家畜DNA。

进一步地，步骤S1中的待测样本选自毛发、早期胚胎、血液、组织或器官；优选的，步骤S2中PCR反应体系包含：样品DNA(100ng/μL)1μL，2×Taq MasterMix 12.5μL，上游引物SRY-F(10μmol/L)1μL，下游引物SRY-R(10μmol/L)1μL，去离子水9.5μL；优选的，步骤1)中的PCR扩增条件为：94℃预热4min；94℃变性45s，53℃退火45s，72℃延伸20s，35个循环；72℃延伸10min。