[发明专利]一种BAT损伤修复模型的构建方法及其用途

说明书

本发明公开了一种BAT损伤修复模型的构建方法及其用途。BAT损伤修复模型（BAT‑IR）构建方法，包括以下步骤：1）小鼠饲养管理与麻醉；2）BAT‑IR构建；3）BAT‑IR鉴定；4）BAT损伤修复效果检测。BAT损伤修复模型（BAT‑IR）构建方法的用途，1）用于BAT组织损伤修复过程中分化聚酯及脂质代谢相关基因表达研究；2）用于BAT损伤修复过程中炎症基因表达及功能研究；3）用于BAT损伤修复过程中细胞异质性及干细胞功能研究。本发明是利用成体干细胞技术、组织再生修复技术及现代分子生物学技术等共同实现，不仅开拓了科学研究模型，同时为BAT损伤修复机制、关键基因筛选、糖脂代谢功能、细胞异质性等研究提供新模型和新方法，应用前景广泛。

技术领域

本发明涉及一种棕色脂肪组织 (BAT) 损伤修复模型（BAT injury andregeneration model，BAT-IR）及其构建方法和用途，属于生物、生命健康和食品研究领域的应用技术。

背景技术

脂肪组织发育和沉积关乎动物的生长、生产、繁殖和健康，也与人类肥胖和代谢性疾病的发生发展密切相关。在人和哺乳动物体内有白色脂肪（White adipose tissue，WAT）、棕色脂肪（Brown adipose tissue，BAT）和米色脂肪（Beige/Brite fat）等，其中BAT中含有较多的线粒体，高表达BAT特异基因如Ucp1、Cidea、Prdm16、Zic1等，在产热和机体糖脂代谢过程中发挥重要作用。因此如何调控BAT发育及功能对人类肥胖等代谢性疾病的预防具有重要指导意义。目前关于BAT的研究主要集中在胚胎发育以及成体组织功能方面，但缺乏BAT损伤修复研究模型，关于成体BAT损伤修复机制及调控方面还未有研究报道。

目前关于BAT损伤修复的研究，存在一系列技术难题，比如：1）缺乏诱导BAT损伤的制剂和方法；2）目前无BAT损伤修复研究模型；3）目前无评价BAT损伤的方法；4）缺乏BAT损伤修复鉴定方法；5）成体BAT损伤修复机制尚不清楚。

因此，建立一种BAT-IR及其构建方法对于探究成年动物BAT损伤修复机制、BAT在糖脂代谢中的功能、BAT损伤修复调控策略以及动物生产和产品品质等方面均具有十分重要的现实意义和巨大的应用前景。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种BAT-IR及其构建方法和用途。

一种BAT-IR及其构建方法和用途，包括以下步骤：

1）BAT诱导制剂（BAT-IR inducing agents，BAT-IR-IA）配制：用0.9%氯化钠（NaCl）溶液配制5% Phosphatidylcholine和5% Sodium Deoxycholate溶液。

2）小鼠饲养管理与麻醉：将10-12周左右的成年C57BL6/J小鼠麻醉，麻醉方法如下：用0.9 % NaCl溶液配制1 %的戊巴比妥钠，小鼠称重后计算注射剂量，注射剂量为50mg/kg，采用腹腔注射方法。注射完后等待5~10分钟，待小鼠进入麻醉期，开展下一步实验。

3) BAT-IR-IA制剂注射诱导BAT-IR构建：将麻醉好的小鼠，置于胸骨卧位，从颈部到肩胛骨下方的毛发被剃光，在无菌条件下沿背中线切开2 cm，每侧BAT沿BAT长度方向注入10~50 µL BAT-IR-IA制剂，然后用可吸收皮下缝线缝合切口。

4）BAT-IR鉴定方法：将构建的BAT损伤小鼠，在BAT-IR-IA注射后第0、5、14天采集BAT样品，通过苏木精-伊红（Hematoxylin-eosin staining，HE）染色观察组织形态；通过Masson染色，检测结缔组织浸润和BAT损伤效果；通过荧光定量PCR检测炎症因子标志基因表达情况；通过Perilipin-1等染色，观察检测BAT损伤修复效果。