[发明专利]一种BAT损伤修复模型的构建方法及其用途

权利要求书

1.一种BAT损伤修复模型的构建方法，其特征在于：

1）小鼠饲养管理与麻醉：将成年C57BL6/J小鼠在标准实验室条件下单独饲养，自由采食和饮水，试验前每只小鼠用0.02 mg/g体重戊巴比妥钠腹腔注射进行麻醉；

2） BAT损伤修复模型BAT-IR构建：将1）麻醉好的小鼠，置于胸骨卧位，剃光从颈部到肩胛骨下方的毛发，沿背中线切开2 cm，然后，沿BAT两侧的长度注入10~50 μL BAT诱导制剂（BAT-IR-IA），注射后用可吸收皮下缝线缝合切口，过程无菌操作；BAT-IR-IA的配方如下，按照v/v，5% Phosphatidylcholine、5% Sodium Deoxycholate和90%的0.9% NaCl；

3）BAT-IR鉴定：将2）构建的BAT损伤小鼠，在BAT-IR-IA注射后第0~14天采集BAT样品，通过苏木精-伊红染色法（HE染色）观察组织形态；通过Masson染色检测结缔组织浸润和BAT损伤效果；

4）BAT损伤修复效果检测：将2）构建的BAT损伤小鼠，在BAT-IR-IA注射后第0~14天采集BAT样品，通过Perilipin-1染色，观察检测BAT损伤修复效果。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是：步骤3）HE染色方法是将BAT-IR-IA注射后第0、5、14天时取BAT组织固定后进行石蜡切片，经过二甲苯脱蜡和不同浓度酒精，100%、90%、80%、70%酒精各5 min，覆水后，放入苏木精水溶液中染色5-10 min，根据染色情况适当增加或减少染色时间，流水冲洗，伊红染色1分钟，根据染色情况，适当增加或减少染色时间，70%、80%、90%、100%酒精各10秒脱水，二甲苯1分钟，在通风橱自然晾干封片观察。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征是：步骤3）Masson染色方法是将BAT-IR-IA注射后第0、5、14天时取BAT组织固定后，石蜡切片脱蜡至水，用苏木精染液染核5-10 min，蒸馏水洗，用Masson 丽春红酸性复红液5-10 min，以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻，1%磷钼酸水溶液分化3-5 min，不经水洗，直接用苯胺蓝或光绿液染5 min；以0.2%冰醋酸水溶液浸洗；经酒精脱水、二甲苯透明后，中性树胶封片，观察检测结缔组织浸润情况。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征是：步骤4）Perilipin-1染色方法是将BAT石蜡切片，经过抗原修复后，用Perilipin-1抗体进行免疫荧光染色，观察检测BAT中脂肪细胞生成情况。

5.一种根据权利要求1所述的方法构建的BAT损伤小鼠的用途，其特征是：1）取BAT-IR-IA注射后第0、1、3、5、7、14天的BAT组织，提取总RNA，通过荧光定量PCR法检测脂质代谢和脂肪合成相关基因mRNA水平，用于BAT组织损伤修复过程中分化聚酯及脂质代谢相关基因表达研究；所述脂质代谢和脂肪合成相关基因包括Ucp1、Pgc1a、Cox7a、Pparg、Adipoq、Fasn；或者

2）取BAT-IR-IA注射后第0、1、3、5、7、14天的BAT组织，提取总RNA，通过荧光定量PCR法检测炎症相关基因mRNA水平，用于BAT损伤修复过程中炎症相关基因表达及功能研究；所述炎症相关基因包括TNFa、IL6、IL10、IL1b；或者

3）取BAT-IR-IA注射后第0、5、14天的BAT组织，进行单细胞分离和单细胞转录组测序（scRNA-seq），用于BAT损伤修复过程中细胞异质性及干细胞功能研究。