[发明专利]一种靶向CD123和CD7的嵌合抗原受体及其用途

权利要求书

1.一种靶向CD123和CD7的嵌合抗原受体，其特征在于，所述嵌合抗原受体包括与CD123特异性结合的纳米抗体VHH01和与CD7特异性结合的纳米抗体VHH10；

优选地，所述纳米抗体VHH01的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、SEQID NO:2、SEQ ID NO:3所示或分别与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3具有至少75％同一性的氨基酸序列；

优选地，所述纳米抗体VHH10的CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:4、SEQID NO:5、SEQ ID NO:6所示或分别与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6具有至少75％同一性的氨基酸序列；

更优选地，所述纳米抗体VHH01的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示或与SEQ ID NO:7具有至少75％同一性的氨基酸序列；

更优选地，所述纳米抗体VHH10的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示或与SEQ ID NO:8具有至少75％同一性的氨基酸序列；

优选地，所述嵌合抗原受体还包括跨膜结构域、胞内信号传导结构域；

优选地，所述嵌合抗原受体还包括铰链区；

优选地，所述嵌合抗原受体还包括共刺激信号结构域；

优选地，所述嵌合抗原受体还包括信号肽；

优选地，所述嵌合抗原受体还包括EF1α、T2A、tEGFR；

优选地，所述嵌合抗原受体还包括连接VHH01和VHH10的Linker；

优选地，所述嵌合抗原受体还包括tEGFR信号肽；

更优选地，所述跨膜结构域和铰链区包括下列分子的跨膜结构域和铰链区：CD8、4-1BB、PD-1、CD34、CD28、IgG1、IgG4、OX40、CD3ε；

最优选地，所述跨膜结构域和铰链区为CD8跨膜结构域和CD8铰链区；

最优选地，所述CD8跨膜结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示；

最优选地，所述CD8铰链区的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示；

更优选地，所述胞内信号传导结构域包括下列分子的胞内信号传导结构域：CD3ζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD4、CD5、CD8、CD21、CD22、CD79a、CD79b、CD278、FcεRI、DAP10、DAP12、CD66d、DAP10、DAP12、FYN；

最优选地，所述胞内信号传导结构域为CD3ζ胞内信号传导结构域；

最优选地，所述CD3ζ胞内信号传导结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示；

更优选地，所述共刺激信号结构域包括下列分子的共刺激信号结构域：4-1BB、ICOS、CD27、CD19、CD4、CD28、CD8α、CD8β、HVEM、LIGHT、CD40、4-1BB、OX40、DR3、GITR、CD30、TIM1、CD2、CD226、CD278；

最优选地，所述共刺激信号结构域为4-1BB共刺激信号结构域；

最优选地，所述4-1BB共刺激信号结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示；

更优选地，所述信号肽包括下列分子的信号肽：T细胞受体的α链及β链、CD3ζ、CD3ε、CD4、CD5、CD8、CD9、CD28、CD16、CD22、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154、GITR、ICOS、IgG6；

最优选地，所述信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示；

更优选地，所述EF1α的核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示；

更优选地，所述T2A的氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示；

更优选地，所述tEGFR的氨基酸序列如SEQ ID NO:16所示；

更优选地，所述Linker的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示；

更优选地，所述tEGFR信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示；

最优选地，所述嵌合抗原受体选自以下组中的任一种：

(1)由EF1α、信号肽、纳米抗体VHH01、Linker、纳米抗体VHH10、CD8铰链区、CD8跨膜结构域、4-1BB共刺激信号结构域、CD3ζ胞内信号传导结构域、T2A、tEGFR信号肽、tEGFR依次连接得到的嵌合抗原受体；

(2)由EF1α、信号肽、纳米抗体VHH10、Linker、纳米抗体VHH01、CD8铰链区、CD8跨膜结构域、4-1BB共刺激信号结构域、CD3ζ胞内信号传导结构域、T2A、tEGFR信号肽、tEGFR依次连接得到的嵌合抗原受体；

(3)在(1)中所述嵌合抗原受体的氨基酸序列的基础上经过取代、缺失或添加一个或多个氨基酸后形成的嵌合抗原受体；

(4)在(2)中所述嵌合抗原受体的氨基酸序列的基础上经过取代、缺失或添加一个或多个氨基酸后形成的嵌合抗原受体。