[发明专利]一种寡糖的分离纯化方法及应用

权利要求书

1.一种寡糖的分离纯化方法，其特征在于，

对发酵液或者反应液进行分离纯化处理，

所述处理包括以下步骤：

a)去除产物类似物；

所述产物类似物包括：分子量低于待纯化的寡糖的分子量的化合物；

b)去除多价阴离子；

所述多价阴离子主要包括磷酸根离子；

c)去除可溶性蛋白；

去除阳离子；

去除阴离子。

2.根据权利要求1所述寡糖的分离纯化方法，其特征在于，

所述a)中，利用水解酶对发酵液或者反应液进行处理，去除所述产物类似物；或者，

所述a)中，利用裂解酶对发酵液或者反应液进行处理，去除所述产物类似物；或者

所述a)中，利用水解酶、裂解酶对发酵液或者反应液进行处理，去除所述产物类似物。

3.根据权利要求2所述寡糖的分离纯化方法，其特征在于，

所述水解酶为糖苷水解酶，所述水解酶的终浓度为1～50U/mL或500～5000ALU/L；

所述裂解酶为N乙酰神经氨酸醛缩酶或者唾液酸裂解酶，所述裂解酶的终浓度为1～50U/mL。

4.根据权利要求1～3任一所述寡糖的分离纯化方法，其特征在于，

所述b)中，利用金属离子对发酵液或者反应液进行处理，去除所述多价阴离子；

所述金属离子的添加浓度为5-1000mM；优选为100-500mM，进一步优选为100-400mM。

5.根据权利要求4所述的寡糖的分离纯化方法，其特征在于，

所述金属离子包括钙离子、镍离子、钴离子、锌离子、铜离子、铅离子、锰离子、镁离子、铝离子、铁离子、钡离子、银离子中的任意一种或者一种以上；

所述金属离子以含有该金属离子的盐的溶液的方式加入；

所述盐的溶液的浓度为该金属盐溶液对应的饱和溶液的浓度。

6.根据权利要求4所述的寡糖的分离纯化方法，其特征在于，

使b)处理过后的发酵液或者反应液pH在6～12，优选为7～10，进一步优选为8～9。

7.根据权利要求5所述的寡糖的分离纯化方法，其特征在于，

所述c)中，对发酵液或者反应液进行超滤；

优选进行从所述发酵液或者反应液中去除分子量≥20kDa的可溶性蛋白的超滤，更优选进行从所述发酵液或者反应液中去除分子量≥10kDa的可溶性蛋白的超滤，最优选进行从所述发酵液或者反应液中去除分子量≥4kDa的可溶性蛋白的超滤。

8.根据权利要求5所述的寡糖的分离纯化方法，其特征在于，

c)中，所述从发酵液或者反应液中去除阳离子通过阳离子交换色谱法进行；

优选地，所述阳离子交换色谱法的固定相为阳离子交换树脂，进一步优选为强酸性阳离子交换树脂；

c)中，所述从发酵液或者反应液中去除阴离子通过阴离子交换色谱法进行；

优选地，所述阴离子交换色谱法的固定相为阴离子交换树脂，进一步优选为弱碱性阴离子交换树脂。

9.根据权利要求8所述的寡糖的分离纯化方法，其特征在于，

还包括一个或多个选自以下的处理步骤：

Ⅰ)对，经过b)处理后的发酵液或者反应液，进行固液分离处理；

所述固液分离处理的方式包括过滤、微滤或离心；

Ⅱ)对，经过c)处理后的发酵液或者反应液进行过滤处理，所述过滤方式优选纳滤；

采用纳滤膜进行纳滤浓缩同时可以去除残留的pH调节剂离子以及酶解后的单糖产物，纳滤膜的截留分子量应该介于目的寡糖分子量和杂质分子量之间；

优选纳滤膜截留分子量小于500道尔顿。更优的，纳滤膜的截留分子量选用100～300道尔顿。