[发明专利]一种子宫内膜癌基因甲基化水平检测试剂及其应用

说明书

本发明公开了一种子宫内膜癌基因甲基化水平检测试剂及其应用，所述检测试剂包括能够特异性检测生物样本中SEQ ID NO:37和/或SEQ ID NO:38所示的核苷酸序列的全长或其任意部分区域核苷酸序列中CpG二核苷酸位点甲基化水平的检测试剂。本发明提供的子宫内膜癌基因甲基化检测试剂以DNA甲基化异常作为检测对象，基于数字PCR技术，可在微反应单元内高效灵敏地完成目标核酸片段的PCR扩增，获取荧光信号进行统计学分析，彻底摆脱对标准曲线的依赖而直接给出靶序列的拷贝数，提高实验结果在批内和批间的稳定性，实现对起始样品的绝对定量，同时提高核酸检测方法的灵敏度，有效减少假阴性的出现，适用于临床检测。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种子宫内膜癌基因甲基化水平检测试剂及其应用。

背景技术

子宫内膜癌是发生于子宫内膜的上皮性恶性肿瘤，属于女性生殖道三大常见恶性肿瘤之一。子宫内膜癌多见于围绝经期及绝经后妇女，平均年龄55岁左右，发病高峰年龄为55～60岁，但近年来其发病率呈现持续上升和年轻化趋势。子宫内膜癌治疗效果与临床分期密切相关，早期子宫内膜癌病患通常有较好的预后，据统计I期、II期病患的五年生存率可达70％以上，III期病患的五年生存率约为40-50％，而IV期病患的五年生存率仅为15-20％。为了提高子宫内膜癌患者的生存质量及改善患者的预后，尽早发现并进行干预治疗显得尤其重要。因子宫内膜癌的致病因素复杂且发病机制尚不明确，想要对其实现早诊早治绝非易事，临床上不少子宫内膜癌患者被发现时已是中晚期，错失了最佳治疗时机。

在子宫内膜癌早期，多数患者没有明显的相关阳性体征，而目前为止尚没有推荐的子宫内膜癌常规筛查方法，当患者表现出临床症状如阴道出血、阴道排液和下腹疼痛时，去医院在妇科医生指导下进行临床诊断时，可能已是中晚期。目前，针对子宫内膜癌的主要诊断手段主要有：1)影像学检查：最常用的无创检查方法为阴道超声检查，主要用于初步判断，腹盆腔磁共振(MRI)检查可用于鉴别黏膜下子宫肌瘤、子宫内膜息肉、子宫肉瘤、宫颈癌等，然而此类方法对子宫内膜癌早癌不够灵敏，无法进行明确诊断；2)子宫内膜活检：子宫内膜癌的诊断标准，通过刮取子宫内膜组织，将刮出物送检，进行可视化观察，发现早期肿瘤，明确病变的性质、部位、累及程度，该方法是一种有创操作，易造成身体不适；3)实验室诊断方法：目前最常用的临床检测标记物是糖链抗原CA125、人附睾蛋白4(HE4)，该方法灵敏度特异性均较低，无法有效地筛检病人。因此有必要研发一种无创的准确可靠的新型子宫内膜癌标识物和检测方法。

表观遗传学是近年来肿瘤研究的热点领域，DNA的甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑以及非编码RNA调控等表观遗传学改变都被认为与肿瘤的发生有着密切关系，其中DNA的甲基化是最为常见的表观遗传学改变，其可调控细胞增殖、凋亡与分化，且水平与肿瘤的生物学特性密切相关。目前研究表明子宫内膜癌与其他多种癌症一样，是由多种致癌因素长期作用的结果，其病变过程是一个多基因变异累积的复杂过程，涉及多种癌基因和抑癌基因的异常甲基化，其中大多数异常甲基化为抑癌基因的高甲基化，高甲基化往往导致抑癌基因的转录沉默。DNA甲基化异常通常发生在癌症早期，并贯穿癌症的发生和发展过程，其甲基化状态一旦形成需要受到外界环境较长时间的持续刺激才会发生改变。因此DNA甲基化指标的检测可以作为癌症诊断、早期筛查以及预后的重要生物指标，有必要开发一种基于DNA甲基化指标的子宫内膜癌检测方法。研究表明子宫内膜癌是由多种致癌因素长期作用的结果，其病变过程是一个多基因变异累积的复杂过程，涉及多种癌基因和抑癌基因的异常甲基化，其中大多数异常甲基化为抑癌基因的高甲基化，高甲基化往往导致抑癌基因的转录沉默。DNA甲基化异常通常贯穿癌症的发生和发展的整个过程，其甲基化状态一旦形成需要受到外界环境较长时间的持续刺激才会发生改变。因此DNA甲基化指标的检测可以作为癌症诊断、早期筛查以及预后的重要生物指标，有必要开发一种基于DNA甲基化指标的子宫内膜癌筛查方法。