[发明专利]智能手机APP结合DSN酶微流体芯片比色检测miRNA-21的方法

权利要求书

1.智能手机APP结合DSN酶微流体芯片比色检测miRNA-21的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

S1、微流体芯片的制备

取载玻片在去离子水中超声清洗后烘干，将其浸泡于食人鱼溶液中，处理完成后取出用去离子水冲洗、烘干、备用；取3-氨丙基三乙氧基硅烷和无水乙醇按体积比1:50混匀，将备用的载玻片浸泡在其中过夜处理，在载玻片表面修饰上氨基，取出并用无水乙醇冲洗、烘干；

S2、Au纳米颗粒的制备

采用柠檬酸钠还原法制备Au纳米颗粒，将去离子水加入容器内并在油浴锅中加热煮沸，然后依次加入柠檬酸钠和柠檬酸，迅速搅拌反应后添加EDTA和HAuCl₄，待溶液由浅黄色变为灰绿色，最后变为酒红色，冰浴终止反应；

S3、脂质体包裹葡萄糖氧化酶的制备

以DOPC为原料合成脂质体，将其与胆固醇混合后加入氯仿均匀溶解，然后通入氮气并在真空干燥箱中过夜，将葡萄糖氧化酶倒入表面附着有磷脂的容器内，均匀摇晃后自然水合，使得磷脂通过自组装形成脂质体，然后将反应液在脂质体挤压器中反复挤压10次以上，得到大小均匀且包裹有葡萄糖氧化酶的DOPC脂质体；

S4、PDMS芯片检测miRNA过程

将S1制得的芯片通过光刻胶技术在表面制备具有特定通道的PDMS芯片，将S2制备好的Au纳米颗粒溶液通过注射器在注射泵推动下缓慢匀速注入到PDMS芯片中的miRNA检测模块，使得Au纳米颗粒修饰到PDMS芯片表面；将表面修饰巯基的L1链，序列为SEQ ID NO.1，通过注射器在注射泵推动下缓慢匀速注入到miRNA检测模块，室温下反应使得L1链修饰到Au纳米颗粒表面；之后将含有链霉亲和素的脂质体溶液注入到miRNA检测模块，室温下反应形成Au纳米颗粒-DNA链-脂质体的三层修饰结构；

S5、智能手机比色检测过程

将miRNA-21，序列为SEQ ID NO.2，和DSN酶吸入注射器中，在注射泵推动下缓慢匀速注入到miRNA检测模块，室温下反应使包裹葡萄糖氧化酶的脂质体释放出来；同时在另一通道内通入含TMB、Hemin，G-四链体葡萄糖的溶液，两个通道内液体均匀混合后进入比色反应模块，室温下反应，TMB逐渐变为蓝色，使用智能手机拍照，照片导入Image J软件中，得到比色反应模块的灰度值。

2.根据权利要求1所述的智能手机APP结合DSN酶微流体芯片比色检测miRNA-21的方法，其特征在于，S2中柠檬酸钠和柠檬酸浓度相同，体积比为3:1。

3.根据权利要求1所述的智能手机APP结合DSN酶微流体芯片比色检测miRNA-21的方法，其特征在于，S2中EDTA和HAuCl₄质量比为1:10。

4.根据权利要求1所述的智能手机APP结合DSN酶微流体芯片比色检测miRNA-21的方法，其特征在于，S3中DOPC和胆固醇的质量比为5:1，葡萄糖氧化酶与脂质体的体积比为4:1。

5.根据权利要求1所述的智能手机APP结合DSN酶微流体芯片比色检测miRNA-21的方法，其特征在于，S4中Au纳米颗粒、DNA链和脂质体体积比为1:1:1。

6.根据权利要求1所述的智能手机APP结合DSN酶微流体芯片比色检测miRNA-21的方法，其特征在于，S5中miRNA-21为100nM 500μL，DSN酶为10U 20μL，相同体积的TMB、Hemin、G-四链体和葡萄糖物质的量浓度比为20:40:1:1000。

7.根据权利要求1所述的智能手机APP结合DSN酶微流体芯片比色检测miRNA-21的方法，其特征在于，所述方法对准确定量的miRNA-21检测浓度范围为1pM～1nM，R²＝0.9907，检出限为0.27pM。