[发明专利]基因编辑系统在制备SLC13A1基因突变低硫酸盐血症模型猪核移植供体细胞中的应用

说明书

本发明公开了基因编辑系统在制备SLC13A1基因突变低硫酸盐血症模型猪核移植供体细胞中的应用。本发明提供了包括SEQ ID NO：16所示SLC13A1‑gRNA1、SEQ ID NO：17所示SLC13A1‑gRNA2和NCN蛋白的试剂盒。本发明还提供了制备重组猪细胞的方法：将SLC13A1‑gRNA1、SLC13A1‑gRNA2和NCN蛋白共转染猪细胞，得到重组猪细胞。所述重组猪细胞为SLC13A1基因发生突变的重组猪细胞。试剂盒的用途为：制备重组猪细胞；制备模型猪；制备细胞模型或组织模型或器官模型。本发明对于低硫酸盐血症药物的研发及揭示该病的发病机制具有重大应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体属于基因编辑技术领域，更具体涉及基因编辑系统在制备SLC13A1基因突变低硫酸盐血症模型猪核移植供体细胞中的应用。

背景技术

低硫酸盐血症(Hyposulfatemia)，又称为低硫血症，是指血液中无机硫酸盐(SO₄^2-)水平下降所导致的一系列由SO₄^2-缺乏引起的症状。SO₄^2-缺乏进一步可能引起人类多种疾病，包括异染性脑白质营养不良、Hunter综合征、Morquio综合征、Maroteaux-Lamy综合征、多种磺基水解酶缺乏症和软骨发育不良等。

SO₄^2-是哺乳动物血浆中含量丰富的阴离子，对许多生理功能至关重要。SO₄^2—共轭是类固醇、抗炎药、肾上腺素刺激剂和阻断剂、镇痛剂等异种生物制剂生物转化的一个重要步骤；SO₄^2-也是激活诸多内源性化合物所必需的，例如肝素、硫酸乙酰肝素、硫酸皮肤素和胆汁酸。此外，糖胺聚糖和硫酸脑苷脂等结构成分的硫酸化对于维持组织的正常结构和功能至关重要。近年来的研究表明，各种饮食和外界刺激通过调节SLC13A1改变血清中SO₄^2-水平，因此SLC13A1在维持SO₄^2-稳态中发挥重要作用。

研究低硫酸盐血症的发生发展机制及研发相应的药物均需要在动物模型的基础上进行，目前常用的动物模型为小鼠模型，然而小鼠不论从体型、器官大小、生理、病理等方面都与人相差巨大，不能真实地模拟人类正常的生理、病理状态。猪作为大动物，其体型大小和生理功能与人类近似，易于大规模繁殖饲养，而且在伦理道德及动物保护等方面要求较低，是理想的人类疾病模型动物。

基因编辑是近年来不断取得重大发展的一种生物技术，其包括从基于同源重组的基因编辑到基于核酸酶的ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9等编辑技术，其中CRISPR/Cas9技术是当前最先进的基因编辑技术。目前，基因编辑技术被越来越多地应用到动物模型的制作上。

发明内容

本发明的目的是提供基因编辑系统在制备SLC13A1基因突变低硫酸盐血症模型猪核移植供体细胞中的应用。

本发明提供了一种试剂盒，包括SLC13A1-gRNA1、SLC13A1-gRNA2和NCN蛋白。

本发明还提供了一种试剂盒，包括SLC13A1-gRNA1、SLC13A1-gRNA2和PRONCN蛋白。

本发明还提供了一种试剂盒，包括SLC13A1-gRNA1、SLC13A1-gRNA2和特异质粒。

以上任一所述试剂盒还包括猪细胞。

本发明提供了SLC13A1-gRNA1、SLC13A1-gRNA2和NCN蛋白在制备试剂盒中的应用。

本发明还提供了SLC13A1-gRNA1、SLC13A1-gRNA2和PRONCN蛋白在制备试剂盒中的应用。