[发明专利]靶向STAT3基因的向导RNA、试剂盒、方法及应用

权利要求书

1.一种向导RNA，应用于CRISPR/Cas9的基因编辑方法或试剂盒，所述向导RNA靶向STAT3基因21号内含子与21号外显子的交界处，所述向导RNA包括(I)～(IV)任一项所示：

(I)具有如SEQ ID NO:3或4所示的核苷酸序列；

(II)在严格条件下与(I)限定的RNA序列杂交且具有相同靶向功能的RNA分子；

(III)与(I)限定的RNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且具有相同靶向功能的RNA分子；

(IV)包括如SEQ ID NO:3或4所示的核苷酸序列且具有相同靶向功能的载体，或包括(II)或(III)所示的核苷酸序列且具有相同靶向功能的载体。

2.一种基因编辑试剂盒，所述基因编辑试剂盒对STAT3基因的21号内含子的5’端进行基因编辑，所述试剂盒包括：

CRISPR效应蛋白或包含编码CRISPR效应蛋白的核苷酸序列的表达构建体；

权利要求1所述的向导RNA，所述向导RNA与所述CRISPR效应蛋白结合形成复合物，所述复合物靶向识别STAT3基因21号外显子与21号内含子的交界处，并在21号外显子和21号内含子连接处进行剪切；及

供体，提供对STAT3基因的21号内含子5’端进行基因编辑的核苷酸序列；

所述供体选自(A)～(D)任一项：

(A)如SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列；

(B)在严格条件下与(A)限定的DNA序列杂交且具有相同功能的DNA分子；

(C)与(A)限定的DNA序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性且具有相同功能的DNA分子；

(D)包括如SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列且具有相同功能的载体，或包括(B)或(C)所示的核苷酸序列且具有相同功能的载体。

3.一种细胞STAT3基因编辑的方法，包括：

培养受体细胞；

制备如权利要求2所述的基因编辑试剂盒；

将所述基因编辑试剂盒通过电转、脂质体、病毒法、转座子法、纳米颗粒、基因枪法、化学诱导法或显微注射的方式导入所述受体细胞中，以得到STAT3基因的ΔS亚型突变细胞系。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述方法还包括对所述突变系中的STAT3基因进行鉴定的步骤。

5.根据权利要求3所述的方法，其中，所述受体细胞选自受精卵细胞、结肠癌细胞、肠上皮细胞、肠道干细胞、心肌细胞、肝细胞、脾细胞、肺干细胞、胚肾细胞、宫颈癌细胞、胚胎干细胞、造血干细胞、祖细胞、T细胞、TCR-T细胞或CAR-T细胞中的至少一种。

6.一种STAT3基因编辑的方法，用于构建STAT3ΔS亚型的基因工程模型动物，其中，所述方法包括：

培养受体动物；

制备如权利要求2所述的基因编辑试剂盒；

将所述基因编辑试剂盒导入所述受体动物的受精卵中，得到F0代模型动物；以及对F0代模型动物进行繁育和鉴定，以得到所述基因工程模型动物。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，“对F0代模型动物进行繁育和鉴定”的步骤具体包括：

对F0代模型动物的STAT3基因进行鉴定，以确认获得F0代阳性小鼠；

对所述F0代阳性小鼠与所述野生型受体动物交配，获得F1代模型动物；

对所述F1代模型动物的STAT3基因进行鉴定，以确认获得F1代杂合子模型动物；

对F1代杂合子模型动物进行自交配种繁殖，获得F2代模型动物；

对F2代末端动物的STAT3基因鉴定，以确认获得纯合子STAT3基因ΔS亚型的基因工程模型动物。