[发明专利]一种胃癌类器官培养基及培养方法

说明书

本发明公开了一种胃癌类器官培养基及培养方法，培养基包括基础培养基和以下终浓度的组分：GlutaMax 1x，Nicotinamide 5‑15mM，A83‑01 0.3‑0.8μM，Hydroxyfasudil 0.1‑100μM，Wnt 3A 100‑300ng/mL，R‑Spondin‑1 200‑300ng/mL，Epiregulin 1‑1000ng/mL和Capsanthin 1‑1000ng/mL等。本发明能够提高胃癌类器官生长速度和细胞活性，最大程度地模拟了体内生存环境，培养的胃癌类器官维持了原发组织的形态结构和基因特征。

技术领域

本发明涉及类器官技术领域，具体涉及一种胃癌类器官培养基及培养方法。

背景技术

胃癌是起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，是我国常见恶性肿瘤之一。胃癌可发生于胃的任何部位，其中半数以上发生于胃窦部，胃大弯、胃小弯及前后壁。绝大多数胃癌属于腺癌，早期无明显症状，或出现上腹不适、嗳气等非特异性症状，常与胃炎、胃溃疡等胃慢性疾病症状相似，易被忽略，因此，目前我国胃癌的早期诊断率仍较低，绝大多数胃癌被确诊时已是中晚期。目前，胃癌的治疗仍旧以手术为主，同时辅以化疗等以巩固治疗效果。虽然近年来医学界在胃癌靶向治疗、免疫治疗等综合治疗方面取得了不错的进展，但总体预后并不乐观。

根据目前研究，胃癌主要的病因是由多种因素共同造成的结果，其中最常见的病因是包括有幽门螺旋杆菌的感染，以及癌前病变，或者是遗传因素，环境以及饮食的因素变化而导致的。肿瘤的发生发展机制错综复杂，建立一套科学严谨的肿瘤研究模型不但有利于肿瘤的基础研究，而且有助于肿瘤的诊断与治疗。类器官具有传代稳定、操作相对简单、培养周期短等优点。同时能够长期保持细胞的基因组稳定性，保留原肿瘤的许多关键特征，因此作为研究胃癌的发生机制是一个很好的体外研究模型。

但现有的类器官生长缓慢，如何提高类器官生长速率且还能维持胃癌类器官原发组织的形态结构等是非常重要的。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述不足，本发明的目的是提供一种胃癌类器官培养基及培养方法，以解决现有胃癌类器官生长缓慢，无法很好的维持原发组织形态结构的问题。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：提供一种胃癌类器官培养基，包括：

基础培养基和以下终浓度的组分：GlutaMax 1x，Nicotinamide 5-15mM，A83-010.3-0.8μM，Hydroxyfasudil 0.1-100μM，Wnt 3A 100-300ng/mL，R-Spondin-1 200-300ng/mL，Noggin 100-200ng/mL，FGF-7 25-100ng/mL，FGF-10 10-15ng/mL，Epiregulin 1-1000ng/mL，Capsanthin 1-1000ng/mL和B27 0.5x，胃癌类器官培养基pH值为7.0-7.2。

本发明的有益效果为：培养基中加入的Hydroxyfasudil是一种ROCK抑制剂，可抑制ROCK1和ROCK2的活性，具有抗氧化，抑制细胞凋亡的作用；FGF-7和FGF-10具有促进细胞增殖作用；Epiregulin是一种生长调节剂，能够维持细胞生长；Capsanthin是一种类胡萝卜素，具有抗氧化、抗肿瘤和抗炎作用，在培养基中添加Capsanthin可更好的维持培养基各组分的稳定性，促进胃癌类器官细胞的增殖。Nicotinamide 和A83-01具有提高细胞活力的作用；Wnt 3A因子为Wnt信号通路因子，R-Spondin-1为调控wnt/β-catenin信号通路因子，Noggin为抑制BMP信号通路因子，本发明还加入了FGF家族的FGF-7和FGF-10因子，共同促进细胞增殖。B27为血清替代物，不需要加入细胞培养中最常用的组分牛血清蛋白（FBS），节约成本的同时还降低了FBS带来的细胞毒性。本发明的pH值可用HEPES进行调节。