[发明专利]猴痘病毒分型试剂、试剂盒及其应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种猴痘病毒分型试剂、试剂盒及其应用本发明针对于猴痘病毒J1L基因或J3R基因保守区域设计了一套猴痘病毒的引物、猴痘病毒的西非型和中非型共用探针、刚果盆地(中非)分支型探针。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种猴痘病毒分型试剂、试剂盒及其应用。

背景技术

猴痘病毒(Monkeypox virus，MPXV)属于痘病毒科，正痘病毒属，具有正痘病毒的典型形态。形态与正痘病毒一致，外形为圆角砖形或卵圆形，大小为200nm～400nm，是结构较为复杂的DNA病毒。猴痘病毒的基因组为双链DNA长约197kb基因组末端包含一个相同但方向相反的末端反向重复序列，该病毒包含190个开放阅读框，其中4个位于末端反向重复序列中。猴痘病毒与天花病毒、疫苗病毒和牛痘病毒是正痘病毒中对正痘病毒中对人类致病的4种病毒、它们都含有可溶性抗原、核蛋白抗原和红细胞凝集素，抗原形制基本相同，彼此之间有交叉免疫性。猴痘病毒主要存在两个分支：西非分支和刚果盆地(中非)分支。两者具有明确的流行病学和临床转归差异，其中西非分支的致死率较低，大约1％～3.6％的感染会导致死亡；刚果盆地(中非)分支则可以导致10％的死亡率，因此很有必要在检测鉴定猴痘病毒的同时实现西非分支型与刚果盆地(中非)分支型快速的基因分型。

猴痘是一种以皮肤出疹为特征的、类似于天花的人畜共患的病毒性疾病，通过密切接触，由动物传染给人，并可以在人与人之间传播，属于人畜共患传染病。除人和猴子外其他灵长类动物和啮齿类动物都可感染猴痘病毒。猴痘病毒主要是通过与受感染的人或动物密切接触传播，或与被病毒污染的物品接触而传染给别人。猴痘病毒通过与病灶、体液、呼吸道飞沫和被污染的物品(如床上用品)的密切接触产生人际传播。猴痘的潜伏期通常为6至13天。这种疾病最明显的特征就是出现严重的皮疹，但皮疹的严重程度可以说是介于天花(Smallpox)和水痘(Chickenpox)之间，而其他症状则包括发热、头痛、肌痛、背痛、淋巴结肿大等。

病毒分离鉴定是诊断猴痘病毒的经典方法，但是猴痘病毒微生物安全级别较高生物因子，对实验室安全级别要求极高，并且检测周期长；同时猴痘病毒与痘病毒质检存在抗原交叉，所以血清学方法的特异性不够；目前猴痘病毒的最常见的检测方法为基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术，比如朱娜等在2009年发表的《猴痘病毒荧光定量PCR检测方法的建立》中根据猴痘病毒F3L基因保守区设计了两套引物探针，该文献中提供的引物探针可以实现猴痘病毒的检测，该方法具有灵敏度高、特异性强等特点，仅需要几个小时即可得到结果。Yu Li等2010年在《J Virol Methods》发表的《Real-time PCR assays for thespecific detection of monkeypox virus West African and Congo Basin strainDNA》文章中针对于三个不同的靶基因位点(G2R基因、C3L基因等)设计了三套引物探针组合实现猴痘病毒通用型、西非分支型、刚果盆地(中非)分支型的分型检测，检测试剂体系相对复杂，成本较高，同时扩增时长需要在1个小时以上，很慢满足超快速检测需求。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于针对猴痘病毒特殊基因J1L和J3R的保守区涉及检测试剂，采用该试剂或者相应的试剂盒能够快速高效地实现西非分支型猴痘病毒和刚果盆地分支型猴痘病毒的分型。

为了解决上述技术问题，实现上述目的，本发明提供以下技术方案：

第一方面，本发明提供了检测待测样品中猴痘病毒核酸的试剂，所述试剂检测猴痘病毒的J1L基因保守区靶序列和/或J3R基因保守区靶序列：

所述猴痘病毒包括西非分支型猴痘病毒和/或刚果盆地分支型猴痘病毒；

所述西非分支型猴痘病毒的J1L基因保守区的靶序列为西非分支型猴痘病毒全基因组第1335～1403位，J3R基因保守区的靶序列为西非分支型猴痘病毒全基因组195722～195790；