[发明专利]猴痘病毒分型试剂、试剂盒及其应用

权利要求书

1.检测待测样品中猴痘病毒核酸的试剂，其特征在于，所述试剂检测猴痘病毒的J1L基因保守区靶序列和/或J3R基因保守区靶序列：

所述猴痘病毒包括西非分支型猴痘病毒和/或刚果盆地分支型猴痘病毒；

所述西非分支型猴痘病毒的J1L基因保守区的靶序列为西非分支型猴痘病毒全基因组第1335～1403位，J3R基因保守区的靶序列为西非分支型猴痘病毒全基因组195722～195790；

所述刚果盆地分支型猴痘病毒的J1L基因保守区的靶序列为刚果盆地分支型猴痘病毒全基因组第1135～1221位，J3R基因保守区的靶序列为刚果盆地分支型猴痘病毒全基因组195222～195308。

2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述试剂用于检测以下(a)～(d)中至少一个碱基区域：

(a)西非分支型猴痘病毒全基因组的第(1335～1340)～(1398～1403)位碱基区域；

(b)西非分支型猴痘病毒全基因组的第(195722～195727)～(195785～195790)位碱基区域；

(c)刚果盆地分支型猴痘病毒全基因组的第(1135～1140)～(1216～1221)位碱基区域；

(d)刚果盆地分支型猴痘病毒全基因组的第(195222～195227)～(195303～195308)位碱基区域。

3.根据权利要求1或2所述的试剂，其特征在于，所述试剂包括探针，所述探针包括探针1和/或探针2；

所述探针1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；

所述探针2的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，所述试剂还包括核苷酸序列如SEQ ID NO:3～4所示的引物对。

5.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，所述探针1和探针2均为Taqman探针，所述探针1和探针2的5’端连接有不同的报告荧光基团，所述探针1和探针2的3’端均连接有淬灭荧光基团和/或MGB；

优选地，所述报告荧光基团选自FAM、NEX、ROX、TET、TAMRA、JOE、VIC、CY3、CY5或TexasRed；

优选地，所述淬灭荧光基团选自BHQ、TAMRA、Eclipse、Dabcyl、Lowa BlackTM RQ或LowaBlackTM FQ；

优选地，所述探针1的5’端连接有FAM，所述探针2的5’端连接有VIC或NEX。

6.权利要求1～5任一项所述的试剂在制备用于诊断猴痘病毒感染相关疾病试剂盒中的应用。

7.用于诊断猴痘病毒感染相关疾病的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1～5任一项所述的试剂。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括以下试剂中的至少一种或多种的组合：RT-PCR缓冲液或酶混合液；

优选地，所述酶混合液包括热启动DNA聚合酶和逆转录酶；

优选地，所述酶混合液还包括RNA酶抑制剂和/或UDG酶；

优选地，所述RT-PCR缓冲液包括PCR缓冲液、dNTPs和Mg²⁺，所述dNTPs为dATP、dTTP、dCTP和dGTP的组合。

9.非诊断目的地检测待测样品中猴痘病毒核酸的方法，其特征在于，所述方法为采用权利要求1～5任一项所述的试剂或权利要求7或8所述试剂盒对待测样品进行PCR扩增的方法，所述PCR扩增的反应条件包括条件1或条件2：

条件1：50℃预热60s；95℃变性后，55～62℃下退火15s；变性至退火重复40～45个循环；

条件2：94～96℃预变性1～10min；94～96℃变性10～15s；55～60℃退火15～50s；变性至退火重复40～45个循环。

10.权利要求9所述检测待测样品中猴痘病毒核酸的方法在猴痘病毒分型中的应用，所述猴痘病毒分型包括将刚果盆地分支型猴痘病毒与西非分支型猴痘病毒区分开。