[发明专利]一种具有高细胞吞噬率的仿贻贝超小脂质纳米颗粒制备方法

说明书

本发明提供了一种具有高细胞吞噬率的超小仿贻贝脂质纳米颗粒的制备方法、制备的产品以及药物施用的用途。本发明制备得到的聚多巴胺修饰脂质纳米颗粒，具有较好的生物相容性，细胞亲和力和细胞粘附性，并改善了纳米颗粒的水分散性，优化了纳米颗粒粒径，增强了体内细胞递送能力，提高了生物利用度。

技术领域

本发明涉及生物材料制备技术领域，具体涉及一种具有高细胞吞噬率的超小脂质纳米颗粒的制备方法。

背景技术

脂质纳米颗粒(LNP)的细胞内药物递送系统目前是临床上有效且通用的非病毒递送技术。LNP可以封装和输送各种生物活性剂，包括小分子药物、蛋白质、肽以及核酸。基于脂质的递送系统具有配方程序和组成简单的优点，且兼具良好的生物相容性和高的生物利用度。到目前为止，基于脂质的药物制剂是FDA批准的常见的纳米药物。由于基于脂质的纳米载体可以以多种方式与细胞相互作用，包括内吞作用，与细胞膜融合等。

然而在实际临床应用中，LNP由于其尺寸、结构、电荷方面的缺陷，细胞吞噬效率往往会由于生物屏障而导致大大降低。LNP大都是由脂质和乳化剂组成的球状结构，直径在大约40-1000nm的范围内，用于制备它们所选的脂质和乳化剂的类型会影响这些结构的大小。而在传统口服给药时，为了达到药物的吸收，必须克服覆盖胃肠道上皮的高达100μm厚的粘液屏障，该粘液屏障由粘液糖蛋白组成，形成三维网络，阻碍大分子渗透它。虽然其网孔尺寸在100-200nm范围内足以使药物渗透，但离子相互作用，氢键或疏水相互作用等相互作用也会限制药物在粘液中的扩散。在基因治疗中，为了在体内发挥作用，脂质纳米颗粒@mRNA配方也需要克服多个细胞内外屏障。首先，需要保护mRNA免受生理液中核酸酶降解的影响，其次脂质纳米颗粒@mRNA系统需要到达靶组织，然后由靶细胞吞噬，最后mRNA分子必须逃离内体才能到达细胞质，从而发生翻译。有效的细胞吞噬和内体逃逸对于mRNA递送至关重要。虽然其机制尚未完全了解，但带正电的脂质可能有助于静电相互作用和与带负电荷的内体膜融合，导致mRNA分子泄漏到细胞质中。因此改进LNP递送系统中颗粒的制备方法，从尺寸，结构和电荷等方面对LNP递送系统中颗粒进行调整，实现细胞内高效递送成为实际应用中的关键。

聚多巴胺(PDA)，由单体多巴胺(DA)在碱性条件下氧化聚合形成，是一种新兴的生物医学应用涂料，因为它具有生物相容性，可促进细胞粘附的表面粘合性以及生物分子的易固定性。在纳米医学中，PDA修饰的纳米颗粒在基因递送、分子诊断等方面已经发现了重要的应用。PDA作为金属、半导体、无机等纳米颗粒的修饰已有大量报道，但其与脂质纳米颗粒的结合鲜有研究。并且聚多巴胺与纳米材料结合往往存在着结合后粒径往往偏大的问题，在溶液氧化过程中，一些不溶性黑色沉淀物倾向于沉积在反应容器的底部，导致PDA表面改性缺乏均匀性和难以保持所需厚度。目前报道的聚多巴胺纳米粒子的提纯方法均为高速离心法，但高速离心法效率差、产率低，且会引起聚多巴胺纳米粒子的不可逆聚集，导致纳米粒子的储存稳定性较差。作为一种新颖的光热治疗(PTT)试剂，聚多巴胺纳米粒子可以将光能转化为热能，但是转换效率较低，大大限制，了其实际应用。此外，多巴胺本身作为神经递质，PDA与人体细胞的相互作用，体内药物递送的有效性和安全性也是目前其作为药物载体用于生物医学领域所受到广泛关注的问题，

发明内容

本发明提供一种超小粒径，高细胞吞噬效率，良好生物相容性的仿贻贝纳米颗粒制备方法。

本发明提供一个方面为，提供一种具有高细胞吞噬率的仿贻贝超小脂质纳米颗粒制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1制备聚乙烯醇溶液：在加热90℃条件下，将聚乙烯醇用去离子水配置成溶液，冷却至室温后至于4℃冰浴中；

步骤2制备预聚多酚类物质溶液：将多酚类物质盐酸盐配置成水溶液得到多酚类物质溶液，加入治疗所需药物，调PH为碱性，反应30min后得到预聚多酚类物质溶液；

步骤3将步骤2的预聚多酚类物质溶液与步骤1得到的聚乙烯醇溶液均匀混合，共同作为水相；