[发明专利]具有增强的细胞毒性的修饰的天然杀伤细胞和天然杀伤细胞系

说明书

对NK细胞和NK细胞系进行修饰以增加细胞毒性，其中细胞及其组合物用于治疗癌症。产生修饰的NK细胞和NK细胞系是通过基因修饰以除去检查点抑制性受体表达和/或添加突变(变体)TRAIL配体表达。

本申请是申请日为2016年7月28日、中国专利申请号为201680049392.8且发明名称为“具有增强的细胞毒性的修饰的天然杀伤细胞和天然杀伤细胞系”的中国专利申请的分案申请，并且本申请要求享有EP 15178899.9、GB 1603655.0、GB 1605457.9和GB1610164.4的优先权。

技术领域

本发明涉及修饰天然杀伤(NK)细胞和NK细胞系以产生具有更多细胞毒性表型的衍生物。此外，本发明涉及生产修饰的NK细胞和NK细胞系的方法、含有所述细胞和细胞系的组合物以及所述组合物在治疗癌症中的用途。

背景技术

通常，免疫细胞在触发导致靶细胞死亡的免疫应答之前需要靶细胞经由主要组织相容性复合体(MHC)呈递抗原。这使得不呈递MHC I类的癌细胞能够逃避大部分免疫应答。

然而，NK细胞能够在不存在MHC I类表达的情况下识别癌细胞。因此，它们在人体对抗癌症的防御中发挥着关键作用。

另一方面，在某些情况下，癌细胞通过表达结合NK细胞膜上的抑制性受体的配体表现出抑制NK细胞的细胞毒活性的能力。对癌症的抵抗可以涉及这些和其他因素之间的平衡。

细胞毒性在本文中是指免疫效应细胞(例如，NK细胞)通过例如释放溶细胞的化合物或通过结合癌细胞膜上的受体以及诱导所述癌细胞的凋亡来诱导癌细胞死亡的能力。细胞毒性不仅受到诱导溶细胞化合物的释放的信号的影响，而且受到抑制其释放的信号的影响。因此，如上所述，细胞毒性的增加将导致更有效地杀死癌细胞，癌细胞抑制NK的细胞毒活性的可能性更小。

作为增加NK细胞对缺乏MHC I类表达但能够抑制NK细胞毒性的癌细胞的细胞毒性的方法，已经提出了去除NK细胞上的抑制性受体功能的基因修饰(Bodduluru etal.2012)。NKG2A已被确定为在这些情况下值得沉默的抑制性受体，因为已知某些癌细胞表达结合NKG2A并在不存在MHC I类表达的情况下抑制NK细胞的细胞毒性的MICA(Shook etal.2011；WO2006/023148)。

在NK-92细胞中已经显示了下调NKG2A表达的另一种方法，其中用编码IL-15的基因转染显示与NKG2A表达的降低相关(Zhang et al.2004)。然而，尽管观察到NK细胞的细胞毒性增加，但该增加可能是活化受体NKG2D的表达伴随增加的结果。这得到NK-92细胞上阻断NKG2A受体与对多发性骨髓瘤细胞的细胞毒性增加无关的观察结果的支持(Heidenreichet al.2012)。尽管如此，值得注意的是NK-92细胞系是具有非常低抑制性受体表达的高细胞毒性细胞系。因此，与NKG2A表达降低有关的细胞毒性的任何增加可能太小而无法检测。

类似的研究已经在小鼠中进行。例如，小鼠在NK细胞上表达称为Ly49的受体，其类似于人类抑制KIR受体。已经表明，通过用抗体片段阻断Ly49受体，NK细胞具有更强的细胞毒性，并且能够在体外和体内杀死鼠白血病细胞(Koh et al.2001)。

这是减少抑制性受体功能的结果，然而，体内的“正常”细胞也更容易受到修饰的NK细胞的攻击，因为修饰的NK细胞不能区分“正常”细胞和癌细胞。这是减少“经典”抑制性受体功能的重大缺点。

已知NK细胞杀死癌细胞的另一种方式是通过在其表面上表达TRAIL。TRAIL配体能够结合癌细胞上的TRAIL受体并诱导所述癌细胞的凋亡。一种推测方法描述了在NK细胞上过度表达TRAIL，以利用这种抗癌机制(EP1621550)。此外，据报道IL-12上调TRAIL在NK细胞上的表达(Smyth et al.2001)。