[发明专利]驼背海马、三斑海马和克氏海马的荧光PCR检测方法及其引物和探针在审
| 申请号： | 202210985216.2 | 申请日： | 2022-08-17 |
| 公开（公告）号： | CN116042842A | 公开（公告）日： | 2023-05-02 |
| 发明（设计）人： | 虞惠贞;吴姗;张明哲;尹文秀;陈哲;张荃;沈旭芳;江惠君 | 申请（专利权）人： | 浙江省检验检疫科学技术研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 浙江千克知识产权代理有限公司 33246 | 代理人： | 黎双华 |
| 地址： | 310000 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 驼背 海马 荧光 pcr 检测 方法 及其 引物 探针 | ||
1.一种实时荧光PCR实时荧光检测驼背海马、三斑海马和克氏海马的方法，包括以下步骤：
(1)样本DNA提取；
(2)实时荧光PCR扩增检测；
(3)结果判定；
其特征在于，实时荧光PCR扩增检测体系的引物和探针分别是：
检测驼背海马的引物和探针是：
IF-F:CCACTGGCAGGGAATTTAGC(SEQ NO.1)
IF-R:TCACTAGGACTGCTCACACA(SEQ NO.2)
FAM-TGCTGGGGCTTCTGTAGATC-Eclipse(SEQ NO.3)
检测三斑海马的引物和探针是：
IF-F:GCTCCTGACATGGCTTTTCC(SEQ NO.4)
IF-R:ATGGGTCAAAGAATGTCGTGT(SEQ NO.5)
FAM-CCCTACCTGTACTAGCAGCC-Eclipse(SEQ NO.6)
检测克氏海马的引物和探针是：
IF-F:ATCGGAGCGCCTGATATAGC(SEQ NO.7)
IF-R:CGCCAAATTGCCTGCTAGTG(SEQ NO.8)
FAM-TTCTCCTCCTCCTTGCTTCG-Eclipse(SEQ NO.9)。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括内参照引物和探针是：
18SrRNA-F：CCTGAGAAACGGCTACCAT(SEQ NO.10)
18SrRNA-R：CGTGTCAGGATTGGGTAAT(SEQ NO.11)
18SrRNA-P：FAM-TGCGCGCCTGCTGCCTTCCT-Eclipse(SEQ NO.12)。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，实时荧光PCR扩增反应程序为(1)95℃，10sec；(2)95℃，5sec；60℃，23sec；40个循环。
4.一种对驼背海马、三斑海马和克氏海马进行实时荧光PCR检测的试剂，包括引物和探针，其特征在于，
检测驼背海马的引物和探针是：
IF-F:CCACTGGCAGGGAATTTAGC(SEQ NO.1)
IF-R:TCACTAGGACTGCTCACACA(SEQ NO.2)
FAM-TGCTGGGGCTTCTGTAGATC-Eclipse(SEQ NO.3)
检测三斑海马的引物和探针是：
IF-F:GCTCCTGACATGGCTTTTCC(SEQ NO.4)
IF-R:ATGGGTCAAAGAATGTCGTGT(SEQ NO.5)
FAM-CCCTACCTGTACTAGCAGCC-Eclipse(SEQ NO.6)
检测克氏海马的引物和探针是：
IF-F:ATCGGAGCGCCTGATATAGC(SEQ NO.7)
IF-R:CGCCAAATTGCCTGCTAGTG(SEQ NO.8)
FAM-TTCTCCTCCTCCTTGCTTCG-Eclipse(SEQ NO.9)。
5.根据权利要求4所述的试剂，其特征在于，还包括内参照引物和探针是：
18SrRNA-F：CCTGAGAAACGGCTACCAT(SEQ NO.10)
18SrRNA-R：CGTGTCAGGATTGGGTAAT(SEQ NO.11)
18SrRNA-P：FAM-TGCGCGCCTGCTGCCTTCCT-Eclipse(SEQ NO.12)。
6.根据权利要求4所述的试剂，其特征在于，探针选自TaqMan探针。
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